求助：大家在养ips细胞的时候有没有碰到有这种形态的，我现在真的养不下去了。。。

碧螺春的秋天

克隆看上去有点黑乎乎的，而且听你描述的挺像是污染了，增殖变慢，不可逆，会导致整盘ips异常。检测下支原体吧，如果真是污染就全部扔掉然后做好灭菌，防止后面的实验还会污染

芦苇浅

回复 lion1987007 的帖子
  m3 I1 N$ A1 W- A7 H, k7 X. D
. q: g4 u! u0 a  I; B6 p对，培养ES过程中iMEF是有一定消耗的，如果当ES还达不到传代要求但是iMEF比较稀的时候有两种补救方法。一种是直接收集培养iMEF后产生的ES medium，然后补加到培养的ES中，另一种就是解冻iMEF并向ES中补加一定量的iMEF，从而达到支持ES生长的状态。你可以试试

葱葱

我养了好久了，一直没培养出iPS，这段时间又出现焦虫了！哎！你的还不错。至少有克隆了！而且是阳性！我之前养饲养层时，ES培养基加进去后饲养层细胞有死亡，后来发现配液有问题，你是否换了培养液了呢？可以考虑一下配液！这是我的建议！另外你能否把克隆初期的照片发给我一张，我想参考一下！

Serene

回复 lion1987007 的帖子# X+ H% Y% {8 |) a
1 p' p! [% s; A5 B5 W
你好，我想问下，你们用的饲养层是直接买的么？还是自己提去的胎鼠，要是自己提取MEF的话，使用前要做什么检测么？

shushiqing2003

我觉得这个feeder密度不稀啊

碧螺春的秋天

可能是支原体污染，建议检测一下

ciweiyuan

回复 Serene 的帖子
' C% G7 i6 y! `( q+ ^; D+ `
4 Y# k0 s; ]! I' ^* I要做支原体检测的

wangxiang

1.可能是支原体污染，建议买个kit检测一下。2.feeder体系培养的话细胞形态好坏很看MEF的品质，你这个铺底的MEF看起来有点问题，而且也有点稀疏了吧。3.既然克隆鉴定没有问题，建议转到feeder-free体系里面去养。你这是什么来源的ips呢？

shushiqing2003

我觉得就是长老了。。这是养了多少天的细胞啊？。。9 A, Z+ `- L; J* u3 `, J1 A8 S3 B
如果不行就重新接种一次。。我有时候也会出现这样的情况。。1 o8 T! B# g) a& u+ c
但是重新接种就好了。
& e0 j+ X* T' T2 _  Q& a

cloudycity

好像是分化了，之前也遇到过这种情况，强制挑出来放基质胶上培养，分化好多，不过还是可以慢慢筛···