求助：大家在养ips细胞的时候有没有碰到有这种形态的，我现在真的养不下去了。。。

lion1987007

如题，我在养ips细胞的过程中有时突然出现这种形态的细胞，而且一出现很快整盘细胞都会变成这样，这样的细胞克隆不仅形态差，而且细胞克隆很难长大，传到基质胶上时会好一些，但是还是没有以前的增值速度，而且是不可逆的，一旦出现了这种形态的细胞，这批ips细胞就基本报废了，请大家帮我分析分析是什么原因？你们在养ips细胞的过程中有没有碰到过这种情况？

wanglimaomao

有可能支原体污染，一般支原体污染，细胞增殖减慢，细胞状态差，但培养基不会有变化。加一些抗支原体的药试试。

922922922

回复 lion1987007 的帖子# _( D: c; v5 u+ @

. y1 C6 f5 Y8 `; g* C一方面有可能是污染，但是也可能是分化了。我的IPS里面有时偶尔会有这种情况，但是不影响其他形态好的的克隆生长。如果怀疑是支原体污染，可以检测一下+ }/ Q  {8 }* D9 J2 F" P" g9 m

henryjia

你用的什么滋养层细胞？似乎滋养层细胞在大量死亡，至少形态不健康

芦苇浅

你们的feeder是iMEF吗？好稀啊，我们养ES或iPS时候iMEF的密度要比这大得多才能支持细胞克隆的生长。

陆萌

感觉MEF有问题呀，一般按60000cells 每平方厘米的密度种滋养层细胞~~1 y" B* s$ M; \5 g( r

Tivah

连feeder带iPS的状态都有点怪，要形容的话好像拿什么固定剂固定过了似的……不过楼主既然说传到基质胶上时会好一些，那可能就是feeder有问题了。3 R' ]$ d2 y9 l# d6 s3 P8 ~
. E" D6 M% I  P: t
另：楼主具体检测过这样状态的iPS吗？比如用qPCR测几个marker(或者直接用的oct4-gfp的MEF)?

plainxie192

做个支原体检测看看吧，如果真污染了，直接扔吧，药物也只能起抑制作用，不能完全杀死，注意培养基是否有问题。

lion1987007

回复 Tivah 的帖子8 l. k5 e# K" Y, T0 r
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这个克隆我们之前已经做过ips鉴定了，确定是正常的ips克隆，开始的时候形态很好，只是突然有一天才发现这种形态的，所以我怀疑是不是污染，但又不像是细菌污染。。。

lion1987007

回复 芦苇浅 的帖子
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1 k: V, H$ M9 [! ?( l1 M; V3 X* s我们用的是CF-1品系小鼠的MEF，开始接种的时候其实不稀，但是出现这种形态的克隆后，感觉MEF也死了不少，形态也不好了。。。