CIK细胞内毒素检测不成功，求解 - 免疫细胞治疗专区干细胞之家



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楼主

发表于 2014-4-13 14:45 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

我们用的是福建一家公司的鲎试剂，实验过程如下：先将15eu的工作品加1.5ml检查用水，然后稀释至10eu/ml，再取50ul该稀释样品，加入950ml检查用水，稀释至20倍（即0.5eu/ml），另取50ul工作品，加入950ul供试品，配置成浓度为0.5eu/ml的内毒素供试品，鲎试剂灵敏度为0.25eu，每支鲎试剂加入0.5ml检查用水溶解，取了8个空安剖，每个加入0.1ml鲎试剂，2个供试品管加入0.1ml供试品，阴性管加入0.1ml检查用水，阳性管加入0.1ml0.5eu/ml浓度的内毒素溶液，阳性供试品对照管加入0.1ml内毒素供试品，放入37度恒温水浴中水浴一小时；如上过程重复了两遍，一次阳性供试品对照管没有凝胶，第二次阳性供试品对照管凝胶后，稍微旋转就溶解了，求高人指导！

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沙发

发表于 2014-4-13 15:03 |只看该作者

估计是你的供试品对鲎试剂有干扰作用。可将供试品进行稀释减少干扰作用。

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xinquan15

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藤椅

发表于 2014-4-14 16:49 |只看该作者

我们的鲎试剂一般用厦门鲎试剂或者湛江安度斯的试剂，每批试剂到后要先做灵敏度符合试验，另外不同的样品第一次检测时还要进行干扰试验，试验证明如果供试品是培养基会有干扰，如果是終液（生理盐水+白蛋白）基本无干扰；还有工作品在第一次溶解时一定注意要充分溶解，我们会用涡旋混匀器震荡15min，之后再逐步稀释，你看看是不是这些注意事项上有没有遗漏，如果不是，我们再讨论