求助，为什么我贴壁法养不出来细胞？

龟酱

回复 cqstemcell 的帖子; Y1 c1 T8 D# V7 B. @, \4 V
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谢谢，这次按这个方法做了试试看

龟酱

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谢谢！

龟酱

回复 jojo1988509 的帖子
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3 `% y0 U' Y" M7 u- m& u' Y9 R" a# G好的~谢谢前辈

dollar007

回复 龟酱 的帖子
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1、前几天让它安安静静的生长；
9 v4 `; ?7 A1 t- o% h* u. j2、你不会用的是玻璃瓶吧？（以前碰到过这类人）- ?+ {$ b* K( b" k: A4 B7 Q6 a4 I  f
3、你用的是什么培养基？血清用的是何方神圣？

龟酱

回复 dollar007 的帖子! V, I& q1 N& f9 `, I

! ?! a( l3 A7 A0 Z! x: `谢谢~已经长出来了。。。可能之前养不出来的原因是太频繁的观察和比较极端条件的固定组织快。。

hefan1234

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; B1 e4 K/ G) `0 P
$ z! J9 J2 b  Z- ^脐带组织清洗去除残血，剥除动脉和静脉后剥取华通氏胶，剪至小颗粒状，加5-6ml培养液至T75培养瓶，微倾斜放置10-20min（加强贴壁效果），放入培养箱水平放置3-4day换液7-8ml，4-5day后换液（镜下观察可见部分颗粒周围少量贴壁细胞），4-5day后传代8-9ml（镜下观察可见大量贴壁细胞），3-4day后冻存，1T75培养瓶可收获500万-800万。

yangwy028

首先考虑你的脐带剪块前没有将血管去除干净，若是有了红细胞的污染的话，细胞 的生长就很容易受到影响。
. t8 C5 e9 y6 P  }: R' i再就是你在安全柜里吹几分钟让组织块贴壁不如放在培养箱中，这样更接近人体的温度。
8 z2 Y, }" W# X5 \最后，当然是最重要的一点就是换液的问题。换液勤的话细胞就生长的快，但是要是因为换液而把组织块从培养皿上碰掉了的话，就不容易提取细胞啦

yangwy028

是不是剪组织块的时候用组织处理器来剪的呢，还是自己手工用剪刀剪的对细胞挤压少，这样爬出来的细胞就多一些的。

雁南飞

把羊膜也去掉，剪碎后直接铺瓶，培养一周试试看。

wuzhongqi

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$ B3 j7 g( b/ J. ~8 }5 X0 [4 Y6 }* A8 q- {! C
我的方法和你的很像，只是先加3ml培养液贴壁，尽量减少组织块漂浮，然后第二天在补加2ml。