关于流式分选后的蛋白或者RNA检测问题

monroelml

大家好，我准备将一种细胞从体外共培养（两种或者三种）体系中用流式分选出来以后做western blotting和RNA检测，但是比较担心RNA的降解问题。请问各位大侠有做过相关实验的么？有什么经验或者建议可以讲下，非常感谢！

青云之上

分选细胞和RNA降解不直接挂钩吧，你是要把细胞分选出来之后再提取RNA吧，分选细胞你是准备分选出来直接就提取RNA还是要扩增培养之后再提取RNA？分选出来直接用，你要保证分选的纯度和细胞量，RNA的降解你要注意在提取过程中能使RNA降解的因素尽量避免，比如RNA酶，温度等，你是要用试剂盒提取还是Trizol直接提取？若果担心降解，记得将所有物品，枪头、EP管等用DEPC水泡过夜，然后高压后使用。

jojo1988509

我也觉得你提的是两个问题，RNA提取时全程注意在冰上操作，弄完了冻-80，没有多大问题啊。

monroelml

回复 青云之上 的帖子3 `+ S( o- D" q. I1 ?! B. A8 `

) d8 N0 Q2 `; w; D你好，谢谢您的回复。6 e. q+ {' M) I3 x1 v, g# ?
我是准备分选出来直接提取RNA。
$ d  Y, s4 z' M0 ]可能问题说的不是很清楚，所以有点误解。我是担心细胞分选的这个过程会导致RNA的降解（或者表达的改变），所以想问问有没有什么措施可以在分选的过程中保护RNA。; {% S/ F- V$ e6 {4 }# ]9 O& e
现在了解到的是可以在分选过程中使用cooling system 或者加入一些RNA保护剂，例如life technologies开发的RNAlater solution。9 D6 ?8 T$ [" e1 ]- t$ I
不知道还有没有别的措施，希望坛友帮忙啦~
/ M. M2 f8 p5 v7 C  `9 R6 C: b5 R( H0 Q

monroelml

回复 jojo1988509 的帖子5 B3 [2 z$ ]/ p* ], D$ v% E

' t- X6 C% h" |1 m+ Z你好呀，谢谢您的回复，可能问题说的不是很清楚，有点误解，请看上一楼。