求助原代肿瘤干细胞培养实验技术

nyming2008

大家好，本人在养原代肝癌干细胞，但是一直没有结果，很是着急，请问哪位朋友做过此类实验的，能给我点启示吗？本人将感激不尽！谢谢大家！

青云之上

没有结果具体是怎么讲？细胞培养不出来？我们实验室弄过乳腺肿瘤干和肺癌干，都不是很好弄，基本都是常规方法，组织分离，机械剪碎，消化，过细胞筛，培养，这方面的文章比较多，你可以参考一下，中文的外文的都有，重要的是你要确定好你要用的培养基，和鉴定标志~~~

tiramisu

你的培养基成分是什么？肝脏组织一般不会污染的，可能是其他环节有问题

nyming2008

回复 青云之上 的帖子+ C' N- Z0 r- f! U# [0 Q- |- t. r

; w9 Z6 c- s; m( E4 J' v- S; H结果就是没有干细胞（显微镜下可见桑葚样），大多细胞是聚集在一起的。我用的培养基是DMEM/F12 ，添加的是EGF, bFGF ,B-27,胰岛素及双抗，打算用CD133及CD90流式细胞仪鉴定，请问你或你们实验室谁在样这样的细胞，还有，你们做的乳腺癌和肺癌的，养出来了没？

nyming2008

回复 tiramisu 的帖子8 @, k( E! I' y. q# o4 U( C
. ~' K8 _6 _" J% w; b: A  ^% K
我用的培养基是DMEM/F12 ，添加的是EGF, bFGF ,B-27,胰岛素及双抗，打算用CD133及CD90流式细胞仪鉴定，请问你或你们实验室谁在样这样的细胞？

maiweiqian

回复 青云之上 的帖子/ D6 E9 g+ k7 A; I
" q+ ?, a7 m0 c5 g) P7 _5 D2 M7 e
想向前辈您请教一下，细胞消化过筛之后，你们是直接把细胞接种在无血清培养基上培养呢还是先让细胞常规贴壁培养传过几次代以后再无血清培养？

细胞海洋

回复 nyming2008 的帖子+ G: l3 r- g% M9 M* X9 X8 y4 S

& C7 a1 P* \* Z9 G% w( m建议上图

青云之上

我们实验室有个研究生之前她是贴壁养的乳腺肿瘤干，看文献报道鉴定CD44和CD24，结果也和文献相符，但是肯定有问题，没有克隆球，之后我是悬浮养的，原代的时候克隆球特别多，但是就是增殖慢，传一两代克隆球就越来越少了，论坛里有个哥们，那天聊了一下，说他们传代没事，但是文章还没发，不说是怎么弄的，所以，这个问题我们也还没有彻底解决。消化过筛之后直接无血清，有血清肯定就分化了，我研究生时养神经干，无血清长得极好的，一加血清就分化~·

tiramisu

回复 nyming2008 的帖子9 l/ O8 z' |0 L" h4 j; ?

1 `. z$ n: d: L: w9 S我们实验室有做过乳腺干细胞的，培养成功了

tiramisu

回复 tiramisu 的帖子. V; m4 D- }/ L4 |* O% f1 m
6 N4 @1 G9 i. i! {' f
他的培养基跟你一样，加的EGF,bFGF,ITS,双抗和PS