求助原代肿瘤干细胞培养实验技术

nyming2008

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: F- x0 l+ |) K5 ?% K9 b; J% g* R7 V* s9 a
麻烦你能给我说一下他的联系方式吗？我请教一下他，谢谢了！

nyming2008

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' Q* A4 `. w% F9 x
3 [9 y  _. j3 O, p3 }; {, f7 t' ^0 t6 C我是直接无血清培养

nyming2008

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: T( V. S% e9 Z7 x. G) g: v% _+ s  E% A8 D6 p" t0 x9 f
请问你是用哪种酶消化的？消化多长时间？

青云之上

回复 nyming2008 的帖子' d8 v# R4 L7 E; i, n6 u! `

3 e3 _1 R1 B! `, K- s( [' N四型胶原酶，DNA酶，透明质酸酶，四个小时，有时候也四度过夜~~~

青云之上

回复 tiramisu 的帖子5 h+ o4 Q3 G; f0 }+ i4 v" D8 t# f
4 \9 H: P' V" C) t" F/ k! a
请问他是悬浮培养还是贴壁培养的？~~~

tiramisu

回复 青云之上 的帖子, X  F# c: F! L2 A7 f. L
3 h* u$ \$ N% e. b8 z/ d
她做的贴壁

tiramisu

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3 i  \+ }3 m# Q$ E" O7 a
& _% J8 I- ]6 X5 c我想问一下，你胶原酶与培养基的比例是多少？还有不加透明质酸酶有什么影响么？1 q: S4 C3 g+ G- o, w* Z

nyming2008

回复 青云之上 的帖子+ C) x0 m9 O* B# ]6 w8 z
4 I0 ~# }, c0 m) J
各个酶的剂量是多少？你是37度4小时吗？

青云之上

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# j5 S, _8 w: J/ a0 e8 |) E4 W
- ?* K$ `: G' a# X# s  U总共是10毫升的消化体系，按照说明书配好酶的储液浓度，具体用量看你消化的实际效果，我们是1毫升胶原酶，100微升透明质酸酶，50微升DNase，剩下的加培养基，37摄氏度水浴消化4小时，每20分钟振荡混匀一下~~~

nyming2008

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4 a# ]) s" M+ S% i0 {8 u9 e9 N" Q- ]7 R
我跟你的这个消化方法及用量都一样，我有两次消化了4个小时，结果组织全消化了，而且不能用了。