鼠EB制备问题请教

xan36

各位前辈，请教个问题，我现在用的是鼠E14T这株胚胎干细胞，在悬浮培养制备EB的时候总会发现EB成团，而且形态千奇百态，不知道大家有没有遇到过？也请大家帮忙分析下是什么原因？
1 D& R' I6 X8 b- C7 P# Z灰常感谢呀~~

zm19900508

可以试一下悬滴法，这种方法制备的EB大小形态都比较均一。网上可以搜到protocol

zm19900508

可以试一下悬滴法，这种方法制备的EB大小形态都比较均一。网上可以搜到protocol

Yedan

细胞一定要消化成单细胞，不然EB肯定有大有小的；ES状态要好，不然很多EB不圆容易挂掉还会贴壁；如果是FBS培养体系，血清量可以降一点，不然EB长得很快，需要多次分盘；如果只是做染色，不用收细胞，可以如楼上所说做悬滴的，不过一个100mm dish盖子只能滴不到100滴，相对麻烦一些。

xan36

回复 zm19900508 的帖子
) O- l# O  A! C8 j7 r* q7 O# D, J7 g
非常感谢回复~~可是悬滴法不是换液时也要悬浮培养了吗？

xan36

回复 Yedan 的帖子
! {3 X% H' O; u' u6 L4 q- `! f9 a5 D- S" s* c' A
非常感谢回复~我是要做诱导分化，EB要培养几天，所以悬滴法制备EB后，换液时也要悬浮培养了吧？另外，我也不知道什么原因，EB总是黏在一起，是因为血清？不过换了无血清培养，也是聚团。我之前看过文献上有提到，在培养时要50rpm震荡，可是没有这个条件。。。

zm19900508

回复 xan36 的帖子9 l$ O+ e2 P0 u1 l# J

- c5 ~+ f6 ^0 }/ z' Hen,是啊，悬浮时已经是一个一个均一的小球了，放在培养箱里养三天，期间可以不换液，不要动培养皿。

xan36

回复 zm19900508 的帖子! v/ a5 f. k$ |2 Q& @; B! _

, L: [. J) C6 f8 [谢谢，可是我也是这样做的，悬滴时状态很好，后面悬浮就又黏在一块儿了

xan36

回复 zm19900508 的帖子7 {" b/ R9 i/ Q, i
2 e! Q+ P7 k% v2 v* Q* ~
谢谢，可是我也是这样做的，悬滴时状态很好，后面悬浮就又黏在一块儿了