康宁的2ml冻存管大家最多加多少毫升细胞液？

月_幻影

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+ ], d8 k! Y* S2 q1分钟内确实不会全融的，一般我们是先准备好盐水或者培养基在离心管中，然后37℃复苏时不等管内液体全融，融至半冰半水状态，只要方便从管中倒出即可，然后快速倒入准备好的盐水或培养基中（这时基本全融啦），然后离心去除冻存液。。。

thor0504

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" r5 s4 V. Y7 U6 M2 Y" A3 b, J. ?' T5 p
这样啊，多谢老兄指点 但是还有一个问题半冰的状态对细胞没有影响吗？另外，你们这种复苏的方法的细胞收率大概能到多少啊？损失很小吗？

月_幻影

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  l9 J. D& `) C
; I+ o# L$ q4 M9 Y9 f- U这样复苏损失不大的，因为当它融至半冰半水状态不挂壁的时候其实也融化大半了，而且准备好的培养基也已暖至室温所以倒到离心管中的时候也就差不多全融了，还有、一管只有不到两毫升的液体好不好，能多难融？。。。

thor0504

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1 `- u, O6 u2 W6 M2 a& F! i
3 |1 N( E% Z- @8 S& S/ J( L$ h! g谢了老兄，这两天忙试验，没来得及看论坛，抱歉回复的晚了，可能是我们复苏温度是40℃的原因，单支融至不挂壁的状态至少要1.5分钟，我回头把复苏温度再调高亮度试试，谢谢你的回复哦

月_幻影

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' q- B$ a3 v$ Z  @
% E! C5 l; R( u+ J1 }+ ~. ^9 b呵呵，没事，复苏的时候1.5min左右应该也没问题，个人建议复苏温度不要再调高了，兄台可以试试在复苏的时候在水浴锅里晃晃冻存管，这样可以加快融化，1min左右融至不挂壁应该没有问题。。。

tiramisu

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2 _$ o; J( J8 @1 k9 ?' k+ G$ I' }# b* N" p' B, B) Z; |2 V8 l) ~
我们一般都小于1min,37度水浴，边晃动冻存管，很快就化了。

suning5

1ml就OK，复苏时放入37度，液体能流动即可，此时冻存管内温度为4°左右。加入PBS或生理盐水离心去掉DMSO时，要用4°冷水，减少温差，保证细胞最大活率。

s02260441

% x( w# c! w5 K
8 O- a* \/ B0 ]; x; |2 k: H2 R6 x( P回复 aochongyu 的帖子
; i6 {+ x$ w, X( ?9 D/ C6 e) ?
不要多拧一圈，会让盖口的O-ring变型，反而会出现缝隙，液氮可能会渗进去。
, K- f) G9 y2 L% ~) q# O* d4 l) Q, N; J2 _/ ~! y) n" T* O+ G0 H
细胞复苏37度下1分钟就够了，过久会伤害细胞，个人做法是搭配肉眼观察，解冻至几乎没有冰块的那一瞬间就接续至下一步操作，通常时间是1分~1分10秒左右。

gd541767393

是外旋的那种吧，我们一般是1.5ml，复苏开盖的时候到是没出现什么异常，但是NUNC得那种内旋的容易出现

xunway

2ml冻存管最多加1.8ml细胞液，一般加1ml或者1.5m; ]$ b# S3 @; y
至于旋盖 稍微拧紧就行 不要太用力
5 T+ h" L/ ^$ P& Q* `- C0 M; w5 W37℃复苏  当然越快越好  一般 1min 能完全溶解的1 h* x9 v+ z9 y2 o2 m* G, x

, m' K5 `0 w5 ?% s9 h# H5 p是否需要离心 看细胞吧 - b7 f. ]6 h+ i* y7 [9 ?
很多细胞还不能离心呢  离心反而不好待细胞贴壁后 换液 反而 还简单些
! ?2 Q5 h; w, y: ~+ i1 v. L看细胞和个人操作习惯了