CAR-T技术原理

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CAR-T细胞技术已经发展出3代，第1代CAR在胞内只有１个Ｔ细胞CD3ζ受体的信号区；在此基础上第2代增加了1个共刺激分子信号；第3代增加了2个共刺激分子信号。这些改进是基于一系列体
4 y! w7 w2 P- f5 B, z外和体内的实验和临床探索。目前，用于临床治疗研究的主要为第2代CART细胞技术，其中用来携带CAR的载体主要来源于逆转录病毒和慢病毒

wang255425

目前已经在开发的第四代CAR-T技术，包括整合表达免疫因子、整合共刺激因子配体等。

ET生物人

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* ?2 z# J  b5 w/ A1 J) d: s/ J  s) W* j. n9 I
西方国家的公司目前是应用于临床研究，国内的医院和公司也有啊

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CAR-T治疗--肿瘤靶向免疫治疗1 ]% T, _( ~0 z+ Z; B* D: u
• CAR-T，全称 Chimeric Antigen Receptor T-Cell Immunotherapy，即嵌合抗原受体T细胞免疫疗法。
5 T& e3 G- k6 M$ l• 通过将识别肿瘤相关抗原的抗体片段scFv和CD3胞内信号域 ITAM在体外进行基因重组，生成重组质粒，再在体外, j; K: [: P1 j1 |
转染到患者的T细胞，使患者T细胞表达能结合肿瘤抗原的受体。转染后经过纯化和大规模扩增后的T细胞，也即
4 E' K  u7 M9 V4 C3 i: a/ ^CAR-T细胞。CAR-T技术利用病毒载体将 CAR稳定表达在T细胞中，经过活化扩增，进入体内后能选择性识别并杀死肿瘤细胞。
, D9 k  A- }, l4 u5 k7 G• 可以特异性地识别肿瘤相关抗原，使效应T细胞的靶向性、杀伤活性和持久性较常规应用的免疫细胞大幅提高，并可克服肿瘤局部免疫抑
. O6 A. M9 ]' h. m- t! p0 D制微环境，从而打破宿主免疫耐受状态，杀灭肿瘤细胞。" O$ Y! J/ B+ ~2 K  t
肿瘤相关抗原：tumor-associated antigen，TAA，是指一些肿瘤细胞表面糖蛋白或糖脂成分，它们在正常细胞上有微量表达，但在肿瘤细胞表达明显增高。
$ G9 T0 D: q) v# a& pITAM：immuno receptor tyrosine-based activation motifs,免疫受体酪氨酸基序活化信号域& c7 M9 q+ c6 X% U+ i6 [

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CAR-T重组质粒的构建4 a& ~( e3 u- A8 N0 M- G) Q* P; W9 J
1. 选择载体：腺病毒、慢病毒或其它能高效转染T细胞、表达嵌合抗原受体的载体。. N7 D. t9 q7 R1 m; S& `, {+ K
2. 选取靶点：即肿瘤细胞特异性或相关的膜表面蛋白，如B淋巴细胞的CD19。
+ W7 J5 W) {5 z' d+ ^( p3 h3. 获取特异性好、亲和力强的抗体的基因序列：这是CAR-T技术的关键和难点所在，9 K& x: t  Y) ]' t/ s! W$ P
因为抗体的产生是免疫原作用下基因重排的表达产物，抗体基因编码序列在  [  o+ F+ P! O; k7 ]
NCBI的数据库是查不到的，而且在目前阶段是不可预测的。动物来源的抗体片
% M# u2 C4 K% O, c' G9 ~段在人体内可能会诱导针对此抗体片段的抗体，削弱长期的治疗效果，所以，往% R7 c4 n3 s9 A- v8 ?# B7 O
往需要把动物来源的优质抗体人源化。& l( `( T# m4 M+ N6 ^; r- _; v
4. 构建重组质粒，感染T细胞：除抗体片段的编码基因，还要加入跨膜区、CD3胞' a6 }. F3 t& |4 B
内区、共同刺激因子以及白介素的编码序列。也是关键技术。
1 h) C8 Y& U; z- [$ a1 b5. 体外验证：嵌合抗原受体是否正确表达于T细胞表面；CAR-T细胞能否有效扩5 M. K4 j7 d4 K( X( \2 @
增；CAR-T细胞是否能识别病人的肿瘤细胞并溶解肿瘤细胞；释放细胞因子的种! ~5 f5 E( x1 [
类和数量，等。  y/ B3 X+ j0 h9 e
体内验证：输入人肿瘤动物模型，活体检测CAR-T对肿瘤的消除作用。

maoyy2011

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chb611301

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