CAR-T技术原理

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CAR-T细胞技术已经发展出3代，第1代CAR在胞内只有１个Ｔ细胞CD3ζ受体的信号区；在此基础上第2代增加了1个共刺激分子信号；第3代增加了2个共刺激分子信号。这些改进是基于一系列体
; Q& ~) J5 @7 Y! S8 p外和体内的实验和临床探索。目前，用于临床治疗研究的主要为第2代CART细胞技术，其中用来携带CAR的载体主要来源于逆转录病毒和慢病毒

wang255425

目前已经在开发的第四代CAR-T技术，包括整合表达免疫因子、整合共刺激因子配体等。

ET生物人

回复 lyj-0017 的帖子% k4 j# F+ L% R

4 b9 m# U: u3 F西方国家的公司目前是应用于临床研究，国内的医院和公司也有啊

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CAR-T治疗--肿瘤靶向免疫治疗
& `1 [2 ^3 O5 w0 m+ q( K• CAR-T，全称 Chimeric Antigen Receptor T-Cell Immunotherapy，即嵌合抗原受体T细胞免疫疗法。
3 O  ?! i: h9 z- N  o! k• 通过将识别肿瘤相关抗原的抗体片段scFv和CD3胞内信号域 ITAM在体外进行基因重组，生成重组质粒，再在体外
- g' ]; Y& z/ k9 ^" x. h+ e2 }转染到患者的T细胞，使患者T细胞表达能结合肿瘤抗原的受体。转染后经过纯化和大规模扩增后的T细胞，也即
" L; ~( m% ]9 @1 M* {" A$ rCAR-T细胞。CAR-T技术利用病毒载体将 CAR稳定表达在T细胞中，经过活化扩增，进入体内后能选择性识别并杀死肿瘤细胞。) Y% A5 ^/ C7 s  {: ]( S
• 可以特异性地识别肿瘤相关抗原，使效应T细胞的靶向性、杀伤活性和持久性较常规应用的免疫细胞大幅提高，并可克服肿瘤局部免疫抑7 h" `0 e( }& U7 v0 I  N
制微环境，从而打破宿主免疫耐受状态，杀灭肿瘤细胞。
( r. r. _: x& D0 B9 k肿瘤相关抗原：tumor-associated antigen，TAA，是指一些肿瘤细胞表面糖蛋白或糖脂成分，它们在正常细胞上有微量表达，但在肿瘤细胞表达明显增高。
" X) b! A& s4 v  c- VITAM：immuno receptor tyrosine-based activation motifs,免疫受体酪氨酸基序活化信号域
; P5 c5 E) `  H- I) C

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CAR-T重组质粒的构建
+ n6 r6 C4 m& _" l$ S1. 选择载体：腺病毒、慢病毒或其它能高效转染T细胞、表达嵌合抗原受体的载体。, [  X" y: _. g0 ~6 r' V& w
2. 选取靶点：即肿瘤细胞特异性或相关的膜表面蛋白，如B淋巴细胞的CD19。( n1 ~3 b! b, g4 q, u2 M! H
3. 获取特异性好、亲和力强的抗体的基因序列：这是CAR-T技术的关键和难点所在，6 L. z: z4 l5 C$ `% f& V2 z. I
因为抗体的产生是免疫原作用下基因重排的表达产物，抗体基因编码序列在5 D' ^: ~1 `6 y; N6 U( Q
NCBI的数据库是查不到的，而且在目前阶段是不可预测的。动物来源的抗体片6 T+ T/ z5 u$ `. r
段在人体内可能会诱导针对此抗体片段的抗体，削弱长期的治疗效果，所以，往
/ v9 s, A  D, I9 X) L  Y7 L3 i- H5 j# g往需要把动物来源的优质抗体人源化。
6 _; |2 j  n$ |' V# a' }, h, \4. 构建重组质粒，感染T细胞：除抗体片段的编码基因，还要加入跨膜区、CD3胞  {6 c& s4 H* S/ P4 o$ O
内区、共同刺激因子以及白介素的编码序列。也是关键技术。
! X; z) D( }- |( F6 _' Z" S. l1 {5. 体外验证：嵌合抗原受体是否正确表达于T细胞表面；CAR-T细胞能否有效扩
/ o: _0 n' T7 a) U4 b1 A5 a) S增；CAR-T细胞是否能识别病人的肿瘤细胞并溶解肿瘤细胞；释放细胞因子的种
) q" {9 C2 R7 Y类和数量，等。3 S* ]8 g2 u0 X2 [, I" {/ N* C
体内验证：输入人肿瘤动物模型，活体检测CAR-T对肿瘤的消除作用。

maoyy2011

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chb611301

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