CAR-T技术原理

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CAR-T细胞技术已经发展出3代，第1代CAR在胞内只有１个Ｔ细胞CD3ζ受体的信号区；在此基础上第2代增加了1个共刺激分子信号；第3代增加了2个共刺激分子信号。这些改进是基于一系列体
1 g" Z" d  G! i: u5 S$ f/ D外和体内的实验和临床探索。目前，用于临床治疗研究的主要为第2代CART细胞技术，其中用来携带CAR的载体主要来源于逆转录病毒和慢病毒

wang255425

目前已经在开发的第四代CAR-T技术，包括整合表达免疫因子、整合共刺激因子配体等。

ET生物人

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西方国家的公司目前是应用于临床研究，国内的医院和公司也有啊

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CAR-T治疗--肿瘤靶向免疫治疗
( L  q$ |; U! p+ f4 T2 E7 ]. P• CAR-T，全称 Chimeric Antigen Receptor T-Cell Immunotherapy，即嵌合抗原受体T细胞免疫疗法。
9 m8 e5 u' }. U# M  ~) t2 y+ U. w• 通过将识别肿瘤相关抗原的抗体片段scFv和CD3胞内信号域 ITAM在体外进行基因重组，生成重组质粒，再在体外
: m& N7 H, }7 q. e9 V8 o$ J! ?0 q& }转染到患者的T细胞，使患者T细胞表达能结合肿瘤抗原的受体。转染后经过纯化和大规模扩增后的T细胞，也即
/ ~0 S3 n4 J$ j, i" S1 t& lCAR-T细胞。CAR-T技术利用病毒载体将 CAR稳定表达在T细胞中，经过活化扩增，进入体内后能选择性识别并杀死肿瘤细胞。+ r2 |0 j6 u: S5 G3 B( H) G' |) O- |
• 可以特异性地识别肿瘤相关抗原，使效应T细胞的靶向性、杀伤活性和持久性较常规应用的免疫细胞大幅提高，并可克服肿瘤局部免疫抑
) `" e$ d3 @7 u制微环境，从而打破宿主免疫耐受状态，杀灭肿瘤细胞。- d% m; l6 [) {* o4 x' L. c
肿瘤相关抗原：tumor-associated antigen，TAA，是指一些肿瘤细胞表面糖蛋白或糖脂成分，它们在正常细胞上有微量表达，但在肿瘤细胞表达明显增高。9 a2 N) `$ E, L: p7 N; K
ITAM：immuno receptor tyrosine-based activation motifs,免疫受体酪氨酸基序活化信号域
. {% z2 R# G+ q3 c5 k

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CAR-T重组质粒的构建
, }+ B; I1 x! w7 q; u. s/ ]5 k# m& X1. 选择载体：腺病毒、慢病毒或其它能高效转染T细胞、表达嵌合抗原受体的载体。8 _5 y9 o6 b# I: b/ u, _7 P
2. 选取靶点：即肿瘤细胞特异性或相关的膜表面蛋白，如B淋巴细胞的CD19。' o# L& e% o( u1 k9 R
3. 获取特异性好、亲和力强的抗体的基因序列：这是CAR-T技术的关键和难点所在，
  ]. _2 S( g. V0 u  c: f因为抗体的产生是免疫原作用下基因重排的表达产物，抗体基因编码序列在; C) p8 g+ A& D6 W! z
NCBI的数据库是查不到的，而且在目前阶段是不可预测的。动物来源的抗体片) g1 N& V: u' o* H
段在人体内可能会诱导针对此抗体片段的抗体，削弱长期的治疗效果，所以，往
. O: v+ U* V3 \$ {往需要把动物来源的优质抗体人源化。$ w% H5 W4 L0 W0 d2 ~( c
4. 构建重组质粒，感染T细胞：除抗体片段的编码基因，还要加入跨膜区、CD3胞
& C; t. F0 ?# b9 _2 @内区、共同刺激因子以及白介素的编码序列。也是关键技术。
2 M" ~# |/ C  ?  C5. 体外验证：嵌合抗原受体是否正确表达于T细胞表面；CAR-T细胞能否有效扩
0 S$ ~" C5 U6 R, H增；CAR-T细胞是否能识别病人的肿瘤细胞并溶解肿瘤细胞；释放细胞因子的种
( G6 h4 h$ W0 Y$ w' a- Z+ M类和数量，等。
! j2 r: F4 F; E' [! K3 g体内验证：输入人肿瘤动物模型，活体检测CAR-T对肿瘤的消除作用。

maoyy2011

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