流式分选后继续培养细胞

shaozi402

回复 dwfrost 的帖子4 b5 J5 w0 k9 ?% `: ^6 M# j
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这个细胞很脆弱的，要严加呵护，分选后第一代长好，以后就没问题了

luyue6453

回复 dwfrost 的帖子# Z9 ?% I+ Z9 k1 W
/ M4 S  B/ j' N: F3 n8 k/ C
转染后为什么不用筛选方法，难道你的质粒没有筛选基因吗？你可以查一下，如果用筛选，细胞就生长很好，没那么麻烦，

dwfrost

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* R2 d4 }$ B" e; k4 ^% D7 b
; H3 f( ]/ |, N  o6 `这个就是GFP筛选。用抗性基因筛的话选感觉浓度把握不好，还有就是瞬时表达怎么控制筛选时间？双向摸索中……

dwfrost

回复 shaozi402 的帖子! D6 k9 {& \6 r% q

1 T4 J8 Y! R- a2 W! M分选后也能看到荧光，就是养一天后细胞全死了，急死人

luyue6453

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0 C: W+ ^. a0 i7 S; I- y# w9 d# s2 B' X/ a8 E: G" ^5 O# a# W* K8 G
你看看相关论文都用什么浓度，根据你的细胞查找，然后你多设几个实验组，浓度幅度50左右，时间也是一样的，一般间隔两个小时，你试试，这样筛完了细胞很容易活。