流式抗体孵育时间和温度？

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用原本免疫组化的一抗做了一下流式，阳性比例比预期要低很多，用的是和免疫组化一样的浓度，但孵育时间只是室温30min.8 D* F! g, }: x( o4 ^, [/ u6 G% h

; _- o: w: L  k1 J8 v查了一下，犯了几个错误，做流式时抗体浓度要比免疫组化大很多，应该增加浓度试试，但是孵育的温度和时间该怎么调呢，是像免疫组化一样37摄氏度1h（4摄氏度过夜）？还是像流式一样室温或4摄氏度15-20min?还是说采用高浓度短时间？* T/ t( P. G2 _7 k7 w+ G3 M# x- P

9 c* t; T4 W8 h3 k- D抗体有限，做不起很多预实验啊，请前辈指导。