胚胎干细胞负筛选问题

gscao

请大侠回答问题
7 {6 z! c: g' p- t8 `, B    小鼠胚胎干细胞基因打靶常用的负筛选有哪些？最好打靶筛选后不影响生殖系嵌合的负筛选方法，谢谢！

genedu

按照最先利用正负筛选系统作为提高基因打靶效率的实验之一，用tk基因作为负筛选绝对没有问题，相对用的药物是FIAU，小鼠胚胎干细胞的筛选浓度为0.1uM（参考）

gscao

非常感谢！我还想问楼上，FIAU和GANC都可以用吗？还是用FIAU更好，能否告诉公司？另外，donor载体必须线性化吗？我在有些文献上看打靶载体不一定线性化。

genedu

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" n7 e% q! F  U% V  K3 A6 d+ p  Z& r) D, f! w# {. p4 F: _* I
您好gscao，首先，您在我的帖子上点回复我才能看到。FIAU还是比较好用的，最起码在我们实验室用FIAU绝对是没问题的，公司用的是Moravek Biochemicals and Radiochemicals，M 251 1-(2-Deoxy-2-fluoro-ß-D-arabinofuranosyl)-5- iodouracil。一般是需要线性化的，那样效率比较高，但是不能一概而论，建议两个都做，择优而行

gscao

genedu，您好！您的建议很好，非常感谢！

细胞海洋

回复 gscao 的帖子4 C4 n5 q/ Z/ A* I
6 p/ p  y4 Z3 @  O4 f6 q2 M
你回复谁 就点击对方回复帖子中的回复按钮 然后输入内容 像我这样
2 g7 M) Z# v# t2 J( }2 g  B' n. ]. ^" m0 S8 x+ `
否则他会看不到7 e( |( s* H! K4 R' m2 C7 P9 k

gscao

回复 genedu 的帖子! M  ~6 J2 z- i& D

; {. p& V' H. y) x5 I- |/ I  c% ?Sigma公司的FIAU可以吗？你建议的公司FIAU很贵啊。

genedu

回复 gscao 的帖子' V5 N/ S2 G+ f- l# F

4 R  p0 Z: D/ Y可以的，没问题

gscao

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5 j" v4 n: I3 t% `; |( Q- \9 ?& I! ^1 d6 X* J0 M$ F/ G
Thank you very much