KSR+2i养mESC

scottist

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$ F; f9 H, H9 I您好，还想请教一下FBS是10%，还是15%？LIF是Millipore的ESG1007么？PD的浓度时1uM么？培养板铺0.1%明胶么？谢谢您了。

lp0030

scottist 发表于 2014-9-16 16:59 ' L8 f' u# n$ b" P4 Y4 u# L7 z
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您好，还想请教一下FBS是10%，还是15%？LIF是Millipore的ESG1007么？PD的浓度时1uM么？ ...

/ e  p! {5 H+ H& u
10%FBS, PD可以用1um，LIF你看着买吧，应该不是只有millipore有吧，或者直接2I加血清，你试试吧，小鼠ES还是比较容易维持的

scottist

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  b4 q  [+ ^- y: ^9 K( H7 v9 x- K: ^7 b: r0 C
明白，再次感谢！

scottist

回复 lp0030 的帖子( j$ h, C: i1 o* K

/ z5 g6 s/ ~9 I8 g, e( o我的是E14，我主要是想无Feeder培养，但效果都不好，幸好有您的指导！感激不尽！

lp0030

scottist 发表于 2014-9-17 08:30 + g3 F; n% f0 i& A2 t
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& D- k' Z! @, I# P7 v我的是E14，我主要是想无Feeder培养，但效果都不好，幸好有您的指导！感激不尽！

; B. I. Z8 E. @- c( ]E14比较好养的，DMEM+10%FBS， 再加LIF和PD或CHIR

scottist

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7 r6 E& W3 l$ n& B0 C$ M
" Y0 [# N# {3 y5 o, l: B" x: P好的，谢谢！

lchanlon

个人觉得feeder free 会有一些细胞分化的。KO-DMEM+ES quality Serum (or KSR) +LIF就可以了。

zm19900508

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% q) N1 L+ V+ R& \4 l2 J3 q5 u# T3 o
不是血清加lif加基础培养液就行了么？为什么要加PD呢？加PD貌似没有影响，加CH克隆会好看些

lp0030

zm19900508 发表于 2014-9-23 08:39
$ h$ J  }9 S# O' q. W- B( H回复 lp0030 的帖子; a! d! Y4 e) {

2 U  q' }- E( j- G' {; K1 j不是血清加lif加基础培养液就行了么？为什么要加PD呢？加PD貌似没有影响，加CH克隆会好 ...

0 y, \# l& h- j, W
129小鼠来源的ES细胞确实LIF加血清就可以。只是培养的细胞中分化的比例多一些，所以有些同学可能会觉得不太好。所以加点抑制剂让细胞更均一一些吧。CH和PD应该都有帮助的。

scottist

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6 N* z4 b; X$ e7 I
/ a, f5 G# z  ?) C% x' U( L谢谢！