个人细胞培养的几个问题

zljbionero

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; t& r( |7 e( e! H% _5 W各位老师，前辈，我在细胞培养方面还有以下疑问，希望各位老师能指教一下$ n$ p# k1 ~+ f3 {% ~+ X
1.细胞培养液的缓冲体系现在主要使用什么，hepes体系用的多吗，CO2体系使用时间过程，CO2溢出后，PH值变大的问题该如何解决，" W$ l3 B9 a: X9 z/ P1 g, l
2.关于谷氨酰胺的使用，现在实验室主要使用二肽还是谷氨酰胺重复添加，个人觉得二肽的释放速度会有点慢，而重复添加谷氨酰胺又会造成氨中毒，请问各位老师是怎么办的
7 |: `3 x) m/ c: n3.康宁的各种培养皿的区别，比如说Non-coated dish，tissue culture treated dish，CELL BIND系列，这三种有什么区别，培养贴壁细胞应该使用哪种，我现在还没有查到tissue culture treated dish是怎么处理得到的
) k$ _. [; G7 C3 w3 x4.细胞的接种密度对于细胞的影响到底有多大，8000-10000/cm2的种植，除了可以控制收获时间外，对于细胞状态的影响到底有多大，过大密度和过小密度对于细胞生长有很大影响吗
. V/ y+ U9 m6 g1 G) M* M5.细胞接触抑制对于细胞老化和分化的影响，即使长到100%，在营养充足和增殖生长因子的刺激下，应该也不会影响细胞的生长，我有见过间充质贴壁细胞长的很满，长到了培养皿的侧边上，+ c+ |0 F2 Z4 B) m& D
6.关于生长因子的保存问题，对于无血清培养生长因子及白蛋白的保存问题，这些蛋白质在液体4度的条件下，可以保存多长时间，我还没有查询到准确的时间，外国pierce文章中写的是1day to a few weeks，而gibco的stempro hESC完全培养基保存时间为1天，mesenPRO完全培养基的保存时间为15天，如果要这么短时间配制的话，用量也会很少，我都不知道该怎么分装了，还想知道各位老师是怎么办的，
( K# N: k& j, ^2 B希望各位老师指导一下，多多感谢

zljbionero

怎么没有老师回答我的问题，

zhusealin

一般的贴壁细胞用tissue culture treated dish，细胞培养板一般是采用等离子处理的

pailishi

1、看你具体培养什么细胞，大家都是使用的基础培养基（D/F12、DMEM、IMDM，EBM-2等），再根据个人需要添加不同因子（包括FBS什么的），个人觉得PH值化不会太大5 R$ a4 g- k+ A4 T) n
3、贴壁细胞用的康宁的tissue culture treated dish，具体可以咨询供应商
% ^( G  O# G' z. @, d4、细胞密度应该会影响细胞状态，影响细胞得率，具体看群体增长曲线
+ \. i, T* h4 h, O% h3 s% z5、贴壁细胞有接触抑制，一般融合90%就会传代或者冻存，应该是在生长的对数期细胞状态最好
2 z' D4 w9 V5 }7 [' s6、生长因子保存时间看具体说明书，一般越短越好，适量分装，尽量集中完成实验或者大家资源共享，避免浪费

WeiTing

回复 zljbionero 的帖子& k6 }/ R/ u3 _% Q% Z- U

+ ^; o% j' B9 q# D1. 通常选用含HEPES的培养基，若是不含HEPES，培养基可添加Sodium bicarbonate (主要的功能则是用来稳定培养基中的pH值)，所以，pH值应该变化不大。
! V8 ^" T& A2 a: V2. 可选用Gibco® GlutaMAX™ Supplement，效果会比一般Glutamine好。& |' S( e. H# e& @
3. 培养皿的处理方法有差异，CELL BIND系列使用后的效果不错。2 y& c& p5 h; P) D) }- |7 N
4. 不断的传代后就可以明显观察到细胞接种密度所产生的影响。

sumanlin

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