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个人细胞培养的几个问题 [复制链接]

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包包
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楼主
发表于 2014-9-18 11:01 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
本帖最后由 zljbionero 于 2014-9-18 11:10 编辑
( Y/ H1 X$ ~6 `" W( W. B, G
. F- Z  A. B. U3 e1 V* c各位老师,前辈,我在细胞培养方面还有以下疑问,希望各位老师能指教一下
4 T. Q9 v8 Y7 u6 K" l7 f6 [$ O1.细胞培养液的缓冲体系现在主要使用什么,hepes体系用的多吗,CO2体系使用时间过程,CO2溢出后,PH值变大的问题该如何解决,- e8 I9 J6 r+ O: k3 W# d
2.关于谷氨酰胺的使用,现在实验室主要使用二肽还是谷氨酰胺重复添加,个人觉得二肽的释放速度会有点慢,而重复添加谷氨酰胺又会造成氨中毒,请问各位老师是怎么办的, |; A% i6 c  j& O% c4 t0 n, V$ C1 S/ h
3.康宁的各种培养皿的区别,比如说Non-coated dish,tissue culture treated dish,CELL BIND系列,这三种有什么区别,培养贴壁细胞应该使用哪种,我现在还没有查到tissue culture treated dish是怎么处理得到的
+ W! k# ], t6 f) ^4.细胞的接种密度对于细胞的影响到底有多大,8000-10000/cm2的种植,除了可以控制收获时间外,对于细胞状态的影响到底有多大,过大密度和过小密度对于细胞生长有很大影响吗
2 }1 v/ A) D/ X0 Z8 S; \: Z, |5.细胞接触抑制对于细胞老化和分化的影响,即使长到100%,在营养充足和增殖生长因子的刺激下,应该也不会影响细胞的生长,我有见过间充质贴壁细胞长的很满,长到了培养皿的侧边上,
. O0 {3 ~- v+ d6.关于生长因子的保存问题,对于无血清培养生长因子及白蛋白的保存问题,这些蛋白质在液体4度的条件下,可以保存多长时间,我还没有查询到准确的时间,外国pierce文章中写的是1day to a few weeks,而gibco的stempro hESC完全培养基保存时间为1天,mesenPRO完全培养基的保存时间为15天,如果要这么短时间配制的话,用量也会很少,我都不知道该怎么分装了,还想知道各位老师是怎么办的,
2 T" ]2 M# U$ g2 G; n/ J$ O4 {希望各位老师指导一下,多多感谢
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沙发
发表于 2014-9-18 11:59 |只看该作者
怎么没有老师回答我的问题,

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藤椅
发表于 2014-9-18 13:55 |只看该作者
一般的贴壁细胞用tissue culture treated dish,细胞培养板一般是采用等离子处理的
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板凳
发表于 2014-9-18 15:13 |只看该作者
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1、看你具体培养什么细胞,大家都是使用的基础培养基(D/F12、DMEM、IMDM,EBM-2等),再根据个人需要添加不同因子(包括FBS什么的),个人觉得PH值化不会太大! ~3 b; c2 m0 t% A
3、贴壁细胞用的康宁的tissue culture treated dish,具体可以咨询供应商- u0 x& A: L' N' ]% a
4、细胞密度应该会影响细胞状态,影响细胞得率,具体看群体增长曲线: _8 L6 e( X* t: r2 S( j0 F$ q! ^
5、贴壁细胞有接触抑制,一般融合90%就会传代或者冻存,应该是在生长的对数期细胞状态最好
# q% Q# ]/ `, t  ~' ^. ^% _6、生长因子保存时间看具体说明书,一般越短越好,适量分装,尽量集中完成实验或者大家资源共享,避免浪费
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发表于 2014-9-19 10:24 |只看该作者
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; b) F1 D' j1 [! \) V! F! [' C8 s) {1 q5 ^0 _
1. 通常选用含HEPES的培养基,若是不含HEPES,培养基可添加Sodium bicarbonate (主要的功能则是用来稳定培养基中的pH值),所以,pH值应该变化不大。
1 }7 k8 C5 u- n) d6 K' T2. 可选用Gibco® GlutaMAX™ Supplement,效果会比一般Glutamine好。, w0 w" i; l$ Z- |, ^& I: j
3. 培养皿的处理方法有差异,CELL BIND系列使用后的效果不错。7 i' w9 T+ n& C9 m- }
4. 不断的传代后就可以明显观察到细胞接种密度所产生的影响。
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发表于 2014-9-19 11:20 |只看该作者
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