个人细胞培养的几个问题

zljbionero

( Y/ H1 X$ ~6 `" W( W. B, G
. F- Z  A. B. U3 e1 V* c各位老师，前辈，我在细胞培养方面还有以下疑问，希望各位老师能指教一下
4 T. Q9 v8 Y7 u6 K" l7 f6 [$ O1.细胞培养液的缓冲体系现在主要使用什么，hepes体系用的多吗，CO2体系使用时间过程，CO2溢出后，PH值变大的问题该如何解决，- e8 I9 J6 r+ O: k3 W# d
2.关于谷氨酰胺的使用，现在实验室主要使用二肽还是谷氨酰胺重复添加，个人觉得二肽的释放速度会有点慢，而重复添加谷氨酰胺又会造成氨中毒，请问各位老师是怎么办的, |; A% i6 c  j& O% c4 t0 n, V$ C1 S/ h
3.康宁的各种培养皿的区别，比如说Non-coated dish，tissue culture treated dish，CELL BIND系列，这三种有什么区别，培养贴壁细胞应该使用哪种，我现在还没有查到tissue culture treated dish是怎么处理得到的
+ W! k# ], t6 f) ^4.细胞的接种密度对于细胞的影响到底有多大，8000-10000/cm2的种植，除了可以控制收获时间外，对于细胞状态的影响到底有多大，过大密度和过小密度对于细胞生长有很大影响吗
2 }1 v/ A) D/ X0 Z8 S; \: Z, |5.细胞接触抑制对于细胞老化和分化的影响，即使长到100%，在营养充足和增殖生长因子的刺激下，应该也不会影响细胞的生长，我有见过间充质贴壁细胞长的很满，长到了培养皿的侧边上，
. O0 {3 ~- v+ d6.关于生长因子的保存问题，对于无血清培养生长因子及白蛋白的保存问题，这些蛋白质在液体4度的条件下，可以保存多长时间，我还没有查询到准确的时间，外国pierce文章中写的是1day to a few weeks，而gibco的stempro hESC完全培养基保存时间为1天，mesenPRO完全培养基的保存时间为15天，如果要这么短时间配制的话，用量也会很少，我都不知道该怎么分装了，还想知道各位老师是怎么办的，
2 T" ]2 M# U$ g2 G; n/ J$ O4 {希望各位老师指导一下，多多感谢

zljbionero

怎么没有老师回答我的问题，

zhusealin

一般的贴壁细胞用tissue culture treated dish，细胞培养板一般是采用等离子处理的

pailishi

1、看你具体培养什么细胞，大家都是使用的基础培养基（D/F12、DMEM、IMDM，EBM-2等），再根据个人需要添加不同因子（包括FBS什么的），个人觉得PH值化不会太大! ~3 b; c2 m0 t% A
3、贴壁细胞用的康宁的tissue culture treated dish，具体可以咨询供应商- u0 x& A: L' N' ]% a
4、细胞密度应该会影响细胞状态，影响细胞得率，具体看群体增长曲线: _8 L6 e( X* t: r2 S( j0 F$ q! ^
5、贴壁细胞有接触抑制，一般融合90%就会传代或者冻存，应该是在生长的对数期细胞状态最好
# q% Q# ]/ `, t  ~' ^. ^% _6、生长因子保存时间看具体说明书，一般越短越好，适量分装，尽量集中完成实验或者大家资源共享，避免浪费

WeiTing

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1. 通常选用含HEPES的培养基，若是不含HEPES，培养基可添加Sodium bicarbonate (主要的功能则是用来稳定培养基中的pH值)，所以，pH值应该变化不大。
1 }7 k8 C5 u- n) d6 K' T2. 可选用Gibco® GlutaMAX™ Supplement，效果会比一般Glutamine好。, w0 w" i; l$ Z- |, ^& I: j
3. 培养皿的处理方法有差异，CELL BIND系列使用后的效果不错。7 i' w9 T+ n& C9 m- }
4. 不断的传代后就可以明显观察到细胞接种密度所产生的影响。

sumanlin

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