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个人细胞培养的几个问题 [复制链接]

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楼主
发表于 2014-9-18 11:01 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
本帖最后由 zljbionero 于 2014-9-18 11:10 编辑 2 O  k+ Q# z2 d$ K

; t& r( |7 e( e! H% _5 W各位老师,前辈,我在细胞培养方面还有以下疑问,希望各位老师能指教一下$ n$ p# k1 ~+ f3 {% ~+ X
1.细胞培养液的缓冲体系现在主要使用什么,hepes体系用的多吗,CO2体系使用时间过程,CO2溢出后,PH值变大的问题该如何解决," W$ l3 B9 a: X9 z/ P1 g, l
2.关于谷氨酰胺的使用,现在实验室主要使用二肽还是谷氨酰胺重复添加,个人觉得二肽的释放速度会有点慢,而重复添加谷氨酰胺又会造成氨中毒,请问各位老师是怎么办的
7 |: `3 x) m/ c: n3.康宁的各种培养皿的区别,比如说Non-coated dish,tissue culture treated dish,CELL BIND系列,这三种有什么区别,培养贴壁细胞应该使用哪种,我现在还没有查到tissue culture treated dish是怎么处理得到的
) k$ _. [; G7 C3 w3 x4.细胞的接种密度对于细胞的影响到底有多大,8000-10000/cm2的种植,除了可以控制收获时间外,对于细胞状态的影响到底有多大,过大密度和过小密度对于细胞生长有很大影响吗
. V/ y+ U9 m6 g1 G) M* M5.细胞接触抑制对于细胞老化和分化的影响,即使长到100%,在营养充足和增殖生长因子的刺激下,应该也不会影响细胞的生长,我有见过间充质贴壁细胞长的很满,长到了培养皿的侧边上,+ c+ |0 F2 Z4 B) m& D
6.关于生长因子的保存问题,对于无血清培养生长因子及白蛋白的保存问题,这些蛋白质在液体4度的条件下,可以保存多长时间,我还没有查询到准确的时间,外国pierce文章中写的是1day to a few weeks,而gibco的stempro hESC完全培养基保存时间为1天,mesenPRO完全培养基的保存时间为15天,如果要这么短时间配制的话,用量也会很少,我都不知道该怎么分装了,还想知道各位老师是怎么办的,
( K# N: k& j, ^2 B希望各位老师指导一下,多多感谢
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沙发
发表于 2014-9-18 11:59 |只看该作者
怎么没有老师回答我的问题,

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藤椅
发表于 2014-9-18 13:55 |只看该作者
一般的贴壁细胞用tissue culture treated dish,细胞培养板一般是采用等离子处理的
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板凳
发表于 2014-9-18 15:13 |只看该作者
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1、看你具体培养什么细胞,大家都是使用的基础培养基(D/F12、DMEM、IMDM,EBM-2等),再根据个人需要添加不同因子(包括FBS什么的),个人觉得PH值化不会太大5 R$ a4 g- k+ A4 T) n
3、贴壁细胞用的康宁的tissue culture treated dish,具体可以咨询供应商
% ^( G  O# G' z. @, d4、细胞密度应该会影响细胞状态,影响细胞得率,具体看群体增长曲线
+ \. i, T* h4 h, O% h3 s% z5、贴壁细胞有接触抑制,一般融合90%就会传代或者冻存,应该是在生长的对数期细胞状态最好
2 z' D4 w9 V5 }7 [' s6、生长因子保存时间看具体说明书,一般越短越好,适量分装,尽量集中完成实验或者大家资源共享,避免浪费
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报纸
发表于 2014-9-19 10:24 |只看该作者
回复 zljbionero 的帖子& k6 }/ R/ u3 _% Q% Z- U

+ ^; o% j' B9 q# D1. 通常选用含HEPES的培养基,若是不含HEPES,培养基可添加Sodium bicarbonate (主要的功能则是用来稳定培养基中的pH值),所以,pH值应该变化不大。
! V8 ^" T& A2 a: V2. 可选用Gibco® GlutaMAX™ Supplement,效果会比一般Glutamine好。& |' S( e. H# e& @
3. 培养皿的处理方法有差异,CELL BIND系列使用后的效果不错。2 y& c& p5 h; P) D) }- |7 N
4. 不断的传代后就可以明显观察到细胞接种密度所产生的影响。
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地板
发表于 2014-9-19 11:20 |只看该作者
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