求教关于酶消化法脐带间充质干细胞的问题

chslyx

请问各位老师，一段十五厘米的长的脐带去掉动静脉剪碎后应该加多少胰酶进行消化比较合适，消化时间一般情况下要多长？
+ T; ~8 w* X8 t+ R% b1 l' J1 t还有请问一下，剥华通氏胶的时候你们会把脐带表皮也剥下来吗？谢谢啦

lizzy_81

可以把皮剥下来，然后剪碎，等细胞爬出来即可。不一定要用胶原酶

荷荷

加胰酶的量根据你得到的胶块体积而定，一般是1:1；我试过用胰酶消化2h，但没有成功，细胞并没有完全从组织块中游离出来，直接把消化后的组织块接种，也没在生长，可能还是方法不得当吧。
; W" A; w- G6 ]" U: l; a至于第一个问题，有人讲不剥离羊膜也就是你说的脐带表皮也可以，但个人感觉剥离后细胞纯度会更有保证。

chimo100

我们没用过酶消化法，是需要把羊膜层、动静脉剥离掉，剩下华通氏胶剪成小块，还是比较容易爬出来的

chslyx

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通常爬出来要几天啊？

fuyinsheng

剪碎后胰酶加入量一般是剪碎组织的3-5倍，消化时间可以在40-50分钟，可以根据实际情况再做调整

末末

用胰酶消化好吗？胰酶消化时间过长对细胞有损伤的吧？用胶原酶试试吧，消化2-4小时吧。我们一直用的直接剥胶的方法，羊膜（就是表皮）可以不去，当然去了应该是更好，最快七八天就能爬出来细胞了。