求助0.1%I型胶原酶如何配？

weychui

本人新手一枚，开始养脂肪干细胞，看到很多帖子配0.1%I型胶原酶的方法都不一样，很混乱。我买的是DMEM高糖培养基，请问如果配的话直接将100mg的胶原酶加到100ml的培养基中可以吗？需不需要加BSA以及滤膜过滤？还有用DMEM高糖培养基用不用加谷氨酰胺？请有经验的大神们赐教。多谢~~

chichao0000

我配的是0.2%的胶原酶，用的时候1：1加入到剪碎的脂肪组织中，终浓度为0.1%。100mg的胶原酶加到50ml的培养基（我用的是低糖培养基），加2mg/ml的BSA,溶解后0.2um过滤后保存于4度。
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沙漠狐o0

我们这边胶原酶都是现配现用。如上楼所说，先配置0.2%胶原酶：称取0.1g胶原酶，加50ml DMEM（经多次实践，用生理盐水也ok）溶解，不过滤也没什么问题。

weychui

回复 chichao0000 的帖子9 h2 R* A9 x" U+ l- ~  m

: T& q. ~, p' B: E' P请问1:1是什么意思啊？谁和谁比？是指胶原酶和脂肪组织等体积吗？为什么要加BSA啊？是必须要加吗？

chichao0000

weychui 发表于 2014-10-23 23:06
* g2 V, I  Y# v回复 chichao0000 的帖子9 K; U* ^4 E# P- }( ]# N- N
" r, E  n0 |2 g7 X* U8 o; P
请问1:1是什么意思啊？谁和谁比？是指胶原酶和脂肪组织等体积吗？为什么要加BSA啊 ...

9 s) m7 |. r6 W# M. ^: J1 k
1:1指的是是指胶原酶和脂肪组织等体积，加BSA可能是减少胶原酶对细胞的损伤吧，具体原因我没探究过。

weychui

回复 chichao0000 的帖子; O2 r6 P& l: H6 \+ P+ r1 k

! \# ]3 v5 B% N. W( [* T/ O) Q, M恩，知道了，谢啦

bleachmen2

就用生理盐水100mg加入100ml没问题。

安毓菡

我们一直是用100mg I型胶原酶溶于100ml无菌PBS中，无需过滤，分装后-20℃保存，效果不错。