求助0.1%I型胶原酶如何配？

weychui

本人新手一枚，开始养脂肪干细胞，看到很多帖子配0.1%I型胶原酶的方法都不一样，很混乱。我买的是DMEM高糖培养基，请问如果配的话直接将100mg的胶原酶加到100ml的培养基中可以吗？需不需要加BSA以及滤膜过滤？还有用DMEM高糖培养基用不用加谷氨酰胺？请有经验的大神们赐教。多谢~~

chichao0000

我配的是0.2%的胶原酶，用的时候1：1加入到剪碎的脂肪组织中，终浓度为0.1%。100mg的胶原酶加到50ml的培养基（我用的是低糖培养基），加2mg/ml的BSA,溶解后0.2um过滤后保存于4度。3 H2 A% w: B0 t/ J6 x

沙漠狐o0

我们这边胶原酶都是现配现用。如上楼所说，先配置0.2%胶原酶：称取0.1g胶原酶，加50ml DMEM（经多次实践，用生理盐水也ok）溶解，不过滤也没什么问题。

weychui

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3 Q/ b: T0 E6 c5 p7 V, T
% h/ p+ I2 [, R$ y- R请问1:1是什么意思啊？谁和谁比？是指胶原酶和脂肪组织等体积吗？为什么要加BSA啊？是必须要加吗？

chichao0000

weychui 发表于 2014-10-23 23:06
/ w+ t' O; F# B8 o/ t回复 chichao0000 的帖子- i, V- C* Z: ~+ |! J- x) s

. E' S/ m: f  J. f请问1:1是什么意思啊？谁和谁比？是指胶原酶和脂肪组织等体积吗？为什么要加BSA啊 ...

8 L' A$ @' R! \: L2 Y6 ~. c1:1指的是是指胶原酶和脂肪组织等体积，加BSA可能是减少胶原酶对细胞的损伤吧，具体原因我没探究过。

weychui

回复 chichao0000 的帖子: U4 \  k& i# b# ?$ v' J) l/ C( y

1 _/ r8 w5 x/ M1 k恩，知道了，谢啦

bleachmen2

就用生理盐水100mg加入100ml没问题。

安毓菡

我们一直是用100mg I型胶原酶溶于100ml无菌PBS中，无需过滤，分装后-20℃保存，效果不错。