Oct-4、sox-2、nanog、lin28在胚胎干细胞中的表达位置，做组化是否需要破膜，谢谢！

缥飘实验员

新人做组化，查到这几个干细胞干性的检测指标，Oct-4、sox-2、nanog、lin28，但是不知道在胚胎干细胞中的表达位置，做组化是否需要破膜，谢谢！

dabai22222

都需要，只要是胞内表达的都需要做透化，何况这几个都是核内表达，染了之后还可以最后染下dapi，看看是不是核定位的，以免假阳性

缥飘实验员

回复 dabai22222 的帖子, G5 z: d) f7 c2 q  h3 T: x: J' j
) N) [! t( {) L, F
救燃眉之急，谢谢老师！最后染个 DAPI，confocal  merge 一下就能判断吧，再次感谢！

缥飘实验员

回复 dabai22222 的帖子
# u. u; [! n; K" F: ]8 ?+ |; z- f1 v1 W  }; s* ~, F2 U
老师好，求求助下做免疫组化时玻片细胞的密度多少合适，在视野的下怎么判断，我图片的这个密度好不好，现在是传代第三天，谢谢

2014-10-30 09:27 上传

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scottist

回复 缥飘实验员 的帖子, U2 L$ d1 `0 z2 \( ?8 a: X( F
0 E! h3 e4 w- _/ ~
图中的克隆不是很好看，有的还有些分化，最好再长几天，等克隆长大些，圆些，拍照的效果会好很多。

wangshan

1.这几个抗体都是核定位的抗体，需要破膜。建议使用荧光二抗做免疫荧光，染DAPI，用confocal拍照看与核的共定位，图片会很清晰漂亮。ps，我觉得染SOX2的时候比较容易出现假阳性，胞质内也会有分布的假阳性。2.细胞看上去有些分化，密度太低，等再长几天再染会效果好些，但要注意细胞状态要好的情况下比较容易染出来。

缥飘实验员

回复 scottist 的帖子2 X& F0 A6 D- K0 @, h$ r

5 y! T1 |  J: ]% q7 H; v0 }" d现在实验室养着第三天就会看见有些分化，实在是很恼火。现在刚接触 H1，现在想做个免疫组化熟悉流程。明天做吧，我们老大说都太密了，还是自己练练手先。谢谢老师的回复！

缥飘实验员

回复 wangshan 的帖子* r: M7 r& D! x3 _2 w& U

0 v6 R7 t2 J1 L, @; L( G# z% ~好的，借鉴各位老师的经验，还是长几天再做吧，谢谢！