RNA提取-OD值过大

加菲菲

请教一下各位，本人最近提取了一次细胞的RNA，结果是OD值2.7，浓度为14ng/ul。现在上传RNA电泳的胶图，请大家帮我分析下我这次的样品还能用来做反转录吗。我现在怀疑是没把细胞洗干净，残留了几十微升的消化液造成的，因为里面有些胰酶，但是前辈帮我分析称应该不至于有如此大的影响，最多2.3。我想请教下造成OD值过大的原因，以便帮助我分析我的样品是不是废了。毕竟细胞也养了一段时间，好不容易才收的。谢谢各位了

顺其自然

你的意思是说，你想知道你所提取的RNA样品有没有被胰酶等其他杂质污染。这个我建议你可以测一下你样品的OD260/OD280，纯度较高的RNA，这个值介于1.8~2.0之间。3 j0 D" U2 U- t0 d3 w
但如果你是怀疑你的OD值过大，如果在你确定你的纯度很高的前提下，那你的这个结果和操作就没问题，因为那就是你的样品提取的RNA确实很多，所以就不需要怀疑自己。

加菲菲

回复 顺其自然 的帖子
+ O, t" x, d/ Z; B  ]) U) x
$ ?5 I* ~0 K8 X* k8 {7 R* n是的，关键是现在怀疑可能是DNA的污染，或者是RNA全部降解了；别人帮我分析这个条带可能是DNA的，在这方面我也不是很会分析。不过，我还是准备反转下再说。谢谢您的回复！

moluxingke

第一次见OD值这么高的，长见识了，我提的RNA很少有到2的，多多少少都会有一点蛋白污染，请教一下用什么方法提的RNA可以把蛋白去除这么干净？

zhouleiwang2

怀疑DNA污染的话，直接用RNA样品做qPCR，就可以判断是否有DNA污染。

加菲菲

回复 moluxingke 的帖子5 |( _3 s5 w& W' a* A' S
/ e  o0 }& a: k* B
我觉得这可能和样品有关吧，我一般都提的2以上，可能是细胞样处理方便的缘故；我也觉得自己提的太大了，呵呵

妖妖空

哎，第一次见多这么高的OD值。用试剂盒提取的嘛，试剂盒提取的话，中间应该有一步反应是专门去掉基因组DNA的吧，操作步骤没问题的话，就先往下做呗，有问题在重新做，你现在还没做RealTime。有什么纠结的，有问题了在考虑重新去除下DNA，纯化RNA。。

加菲菲

回复 妖妖空 的帖子! l7 e* ~1 N! K7 X; X8 g
+ t2 r7 t% W/ T& l
谢谢，我会的

yeshch

我们一般看两个比值：前面的OD260/OD280在1.8-2.0之间，后面的在2.0-2.5之间，大点（2.7）问题不大，应该是比较纯，但是你的浓度只有那么小（我们经常>1000）。个人建议，浓度这么低就不要浪费时间了，重新来吧！come on！