求助：细胞不能消化成单细胞 - 实验室综合讨论区干细胞之家



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yylhxylong

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帅哥研究员

楼主

发表于 2014-11-1 22:28 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

我的细胞在N2B27+PD+CHIR的细胞中培养，然后挑单克隆5 Q& O# j3 E% [0 l
结果单克隆用accutase不能消化成单细胞，加量加时间都不管用~~
不知道各位有没有碰到过？有没有什么解决的方法~~9 h+ i- m7 }8 |' ~+ C
THX

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沙发

发表于 2014-11-2 15:59 |只看该作者

可否换成消化能力更强的酶，比如胰酶

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wateryong

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藤椅

发表于 2014-11-3 09:17 |只看该作者

用高浓度的TE试一下吧。。再不行就用dispase先处理一下。然后在用TE消化。

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minxianhu

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板凳

发表于 2014-11-3 10:24 |只看该作者

我们是采用0.05％的胰酶消化，3mL即可。

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woshizh

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报纸

发表于 2014-11-3 11:55 |只看该作者

之前的细胞有没有铺胶，也有可能是挑的时候把胶一起挑下来把细胞粘连了

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hou88com

新手上路

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地板

发表于 2014-11-4 15:52 |只看该作者

为什么不用胰酶消化？0.05%的浓度可以试试

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a279915845

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小小研究员

7楼

发表于 2014-11-4 16:39 |只看该作者

accutase消化能力比较弱，要求消化的时间比较长，我一般使用的是0.25%或0.05%的胰酶水浴消化，在镜下观察，如果没有消化成单个，可以用吸管机械吹打，可以使用网筛过一下，基本上可以成单个细胞

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yuanyecat

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8楼

发表于 2014-11-25 14:51 |只看该作者

以我的经验，全部用胰酶不太好，先用胰酶消化十秒钟，之后再用accutase就好了。

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