细胞冻存之后计数结果细胞数变少了，怎么回事？

20084720113

比如冻存前计数每支管1*10e7，复苏时再计数，只有0.5*10e7，几乎少了一半，怎么损失这么多？台盼蓝染色也没看见很多死细胞或者细胞碎片啊

yaolinzhang

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& y/ i; C' T2 l) C& R
/ R8 @" Y% F- r, q* g不知楼主是如何计数的，若用传统方法，问题出在：未作稀释；混匀不充分；只做了一次计数

s02260441

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$ ~8 w+ a* K/ u1 O: L4 a3 z5 [6 y9 m3 E9 ^, |
建议叙述下你的操作过程，只讲结果版友们很难帮你。

hefan1234

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  V1 g3 d& R4 n, S5 V% m
6 O  `- n' D$ H7 M; X5 x原因可能有很多：1.冻存时计数不准确，实际细胞量没那没多；2.冻存时胰酶没有去除干净，细胞膜破裂了，细胞量变少；3.冻存方法或冻存操作不行，细胞冻存复苏后损伤较大导致细胞破裂，细胞量变少；4.取样计数时细胞浓度不同，计数存在的差异。至于死细胞和细胞碎片，可能离心洗涤细胞时把细胞碎片洗掉了。具体原因，还是要楼主自己实际操作去发现了。
( I1 i: x& p7 _: b

倒腾细胞

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! X# R2 _- G9 l6 E! f1 l) X' g
3 N; v" ^. _+ B" A: c; ^前辈们原代和传代的时候计数 会计多次取平均值么？

s02260441

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8 K8 B. d3 r2 F- g& c& h4 U) C1 ?4 u: i, b5 c
计数2~3次平均就很够了，但是要确保自身计数能力是没有问题的。* g% C) q1 h, J) o  k

7 N- v, l2 y. C$ K* g可以测试看看一份样品给不同的人计数，相互比较一下就知道了。

chenchunlei

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; F" z. T$ K; ^
3 V" T5 \, A8 k4 G7 w7 H: p冻存的时候有没有将细胞吹成单细胞，建议冻存的时候去两个样去计数，最好两个人一人记一个，这样可以减少误差。还有是不是你的冻存液有问题，冻存的时候是不是梯度降温，最后放入液氮里。复苏是最好快速复苏。

saifast00

应该不是冻存的问题，既然已经说显微下观察台盼蓝看不到死细胞或碎片，虽然低速离心会去掉一些死细胞/碎片，但，说真的，一般效果不明显；如果不是冻存出现问题导致细胞死亡，那么就只可能是计数问题了。你冻存前后稀释比例或者细胞悬液总体积注意了么，计数时候是不是弄错了这两样？还有一种可能就是复苏细胞的时候没吹打一下，细胞沉在冻存管底部，有所损失，但不会损失一半这么多

晴斗斗

个人觉得最大的问题可能是计数问题。是否混匀了取的样，取样位置是否能反映平均细胞密度？

791849046

1：两次计数的方法相同吗，最好使用仪器计数，不要人工计数；
" C  {+ r7 C8 P, C  r% r  h/ N2：:冻存时计数不准确，实际细胞量没那没多；.
( a) }2 K8 j  i! M7 j* B3：冻存方法或冻存操作不行，细胞冻存复苏后损伤较大导致细胞破裂，细胞量变少；
, R4 A- c% y  ]  l7 C* e# \, G3 O4：冻存和复苏都有离心的过程，细胞的每次离心都会损失一定量的细胞；* f. ]8 I7 H- R- n- m) O; X' s
5：取样计数时细胞浓度不同，计数存在的差异。:
* p6 `9 u" @( a, a/ p具体原因，还是要楼主自己实际操作去发现了。