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[请教] 如何防止细胞凝团?   [复制链接]

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包包
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楼主
发表于 2014-11-8 19:56 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
打算给一批老鼠注射细胞,时间前后大概一个小时,怎么防止细胞邻团,保持分散状态?
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金话筒 优秀会员

沙发
发表于 2014-11-10 11:22 |只看该作者
细胞结团很大原因是消化细胞的时候,释放出了细胞内核算从而引起细胞结团,楼主可以尝试用dispase来消化细胞,这种酶比较温和,对细胞损伤小。
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藤椅
发表于 2014-11-10 12:00 |只看该作者
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8 i1 i% Y3 ]- I! n- A: v6 H' [! M- x; t0 M
用生理盐水洗细胞后用70um的漏筛过滤一下把团块去掉,再放1%的白蛋白重悬液试试,这样防止聚团。
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板凳
发表于 2014-11-12 10:18 |只看该作者
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最好要用不含钙镁离子的溶液做悬浮,而且之前的时候,消化时间要够长,消化时间因细胞种类的不同而不同;其次,如果细胞长得过多,也经常会出现吹打不匀的情况,这就要求吹打次数要增加;还有吹打时加入的细胞,过多会导致吹打不匀。
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报纸
发表于 2014-11-12 11:01 |只看该作者
收集细胞的时候收集旧培养基,酶消化后用旧培养基终止消化,离心洗涤后用注射用电解质液(勃脉力A)重悬,并用70μm的漏筛过滤,离心洗涤后用2%的白蛋白重悬,用电解质液定容混匀。
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地板
发表于 2014-11-13 15:37 |只看该作者
尝试下anti clamp agent(invitrogen)+筛网过滤
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发表于 2015-2-27 12:55 |只看该作者
1、消化收集后一定要重悬均匀,然后用100目的细胞筛网过滤,加入终浓度为1%的白蛋白会好很多;
/ y+ W- C  d- d2、有的细胞抱团是原因消化过度导致细胞死亡产生的,所以也要注意消化的时间。
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发表于 2015-3-3 09:05 |只看该作者
细胞筛网过滤,还有用3%的人血白蛋白和生理盐水重悬,细胞尽量不要放置太长时间,制备完尽快注射或者回输
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发表于 2015-3-3 09:13 |只看该作者
重悬细胞后,加入DNA酶,37度孵育10-15分钟,再过下筛网就能好很多!
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发表于 2015-3-3 10:19 |只看该作者
如果是制备好的分散的单个细胞,就吹打均匀后加入1%白蛋白或者血浆,可以增加细胞稳定性,避免成团
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