求助，有做过羊膜上皮细胞的大神吗？求帮忙

帝国黑骑士

羊膜是包裹胎儿的那一面，是一层薄而透明的膜，和它连着的是绒毛膜，应该没撕错吧，很好洗的，建议用0.25%的胰酶，适当用剪刀剪剪消化更充分，基本上第二次消化的细胞会多一些，你在试试摸索摸索！

coffee.cat105

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我每次处理羊膜都能搞出四五层来，胎儿面最外面那一层也消化过，没有细胞啊，贴着绒毛膜的的那一层倒是能有细胞，但是细胞不多，贴壁也很少，是我撕错了吗？

听不到

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没权限在留言板上回复4 A7 R% L: ]3 L+ p$ s& j. q- ~
我成功贴壁了，但是成功的莫名其妙，我觉得是不是偶然那种...我是撕下带血丝的那层后用盖玻片轻轻刮了羊膜，刮下了一些粘液，不敢用力刮。然后0.05%胰酶37度水浴10min后过滤离心种瓶，剩下的再消化40min后过滤离心种瓶，最后是40min这个贴壁了。但我不知道能不能重复出来，所以最近打算再做一次

coffee.cat105

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+ j  \$ t4 b6 z: N6 Q; p贴壁的细胞量大吗？我每次都能有些皮样的细胞有些间充质样的细胞，但是上皮样的细胞每次都不长
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$ z% @8 p$ [& K0 a5 k您是做的胎盘上的还是胎盘周围的？我感觉您的描述像胎盘周围的呢？

听不到

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. ^# j3 r- y! U挺多的，我处理后第三天看的，基本就可以传代了那种，上皮样细胞比较多，有少量间充质样细胞，然后我现在传到了F1代，感觉明显间充质样细胞变多了，不知道培养液能不能起到选择的作用

听不到

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我觉得我这次之所以能长出来也有部分原因是我取羊膜的时候是让他泡在双抗PBS里的，然后就没结冰...实在是我上次直接放在冰盒里拿回来，然后完全结冰了就，估计细胞都冻死了

coffee.cat105

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您取的羊膜是哪一部分？能描述一下吗？我是取的胎盘边上的部分，拿到后撕掉胎儿面的最外层和有血那一面的最外层，这样就能有细胞，但是贴壁很少，也很不长，我一直觉得我取材不对，是不是这个原因啊？8 C) {9 D4 L( z2 R- U  {

听不到

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我不知道...我不是临床的，是找的医生要的羊膜，他直接给我的，所以我也不知道取得是哪部分
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听不到

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6 A& o5 ^% k3 t% g; ?# Q' y我拿到的挺大一部分，所以我理解的是拿的是胎盘上的，具体的我也不是很清楚，不过我是只撕下了有血的那层，我理解的是另外一面最外层就是羊膜了，羊膜上皮层不是在最外面吗？

coffee.cat105

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哦，那你有没有用胶原铺板？