脐带间充质干细胞爬不出来，求教！

听不到

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. B' g8 x: k- K, @) k" P3 f8 B3 D; A- W, O; r1 V4 ?
我甚至觉得分三个皿都可以...

chslyx

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' d6 V) l4 X6 d0 c3 H+ H# K3 R3 ~/ g: J
如果我今天才换到培养瓶里面，那还可以爬出来吗？培养基加了8ml

2013sp

1、细胞因子加bFGF较好。- y; l3 B8 H! s8 J, z" W# I: d
2、组织块太密。

CELL007

第一，酒精不要用；
5 ]3 H( C; r" z# q( h& n/ i第二，充分剪碎，然后均匀铺，你铺的太密的，间隙差不多0.5cm吧；
+ a# [' }3 |& M第三，我看到你的组织块都飘起来了，你铺上后，马上就放培养基了，还是贴2小时，我的建议是先贴壁2小时会最好；9 H6 C( o. I% l, n: q* D
          或者，你在培养基中添加 促进贴壁的物质；最好要要处理的瓶子。
  G. d5 g! a6 ~3 e/ N* `第四，因子，可以加bFGF。
3 d- h  `9 s' o; T" L* ?第五，前4天都不要动啊，否则就飘起来了，飘起来了就不好长了。
9 Y, s+ w4 J9 g0 g5 c  希望能帮到你。
7 X' G5 T6 B5 S# ^' e- F1 p

chslyx

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! {! R( o  r6 Z( k# A$ f! E% I8 h. Z3 A
好的，谢谢，我试试/ s( W1 f3 y0 C) }

chimo100

第一你可以考虑一下75%乙醇对脐带的伤害。因为不同的脐带对75%乙醇敏感性不一样。有的脐带加入75%乙醇很快皱缩，基本上30秒就可以了。
" U, B& P( W4 T7 w4 f第二组织块接种太密集了，不利于细胞的爬出。0 r" \7 _' T5 B( [: J" Z: E
第三你的运输时间应该没有太大问题，我做过七八个小时运输过来的脐带，还是可以爬出细胞的。

weijunning

运输过程不加任何液体也没有问题，这不是主要问题，我们已经试验很多次；另外，你的组织块排列太密，这一个培养皿完全可以分成三个培养皿，最好将组织块绞碎呈肉泥状，用弯头镊子将组织块整齐排列在培养皿中，组织块间最好有0.5~1.0cm的空隙。 洗液使用生理盐水+双抗即可，75%酒精消毒容易对细胞造成伤害，如果非要用75%酒精，消毒时间控制在1min之内，尽快清洗掉。另外，可换低糖DMEM培养基进行培养。

月_幻影

1.运输过程只要保证无菌洁净即可，也不一定要泡在PBS中；
& J' f' u- ?$ U2.消毒不用乙醇浸泡的，我们一般都是用加了双抗的盐水清洗干净即可，再说后面剥离出胶来羊膜是弃掉的；
1 L8 l( f7 R9 J( w6 X! c+ c3.感觉LZ剪的组织块不是很细呢，而且皿中的组织块太多了，都飘起来了，这个量都够铺俩瓶了；/ q% S2 D6 M+ ^# ?/ {
4.组织块铺瓶/皿后不要急着加培养基进去，不然组织块都飘起来了怎么做原代？怎么会爬出细胞呢？建议铺瓶/皿后先倒置培养2~6h后正置过来，再加入培养基，加培养基的时候要缓慢，防止吹起组织块；
5 K% B6 _( b; E- N% ~6 q5.加入培养基后建议2~7天内不要移动或者少移动，7~15天左右大约就有细胞爬出了；
! y4 W( r* W; Q. g% G9 g0 Z7 ]) [最后，祝lz实验成功！

thor0504

2 |" K1 Z6 b1 C* o7 q
- H, l8 ]. u. W9 d# O; t" ?回复 chslyx 的帖子2 q% v" N8 V0 {4 Z

: N" o4 X* t/ s! t1 ~( i" x" s保持之前照片中的密度养了几天了？太久的话建议重新来过吧。
* R6 }; c) G$ }0 U个人感觉主要问题如下：
* r4 p7 m, d$ t% h1、组织块大小太大了，而且密度也实在太大了，感觉这1皿里的组织块量接种到175瓶里都不嫌少；. y8 `+ b. m! W. `" I
2、培养基量的控制，培养基的量刚好够基本覆盖容器底面，并且不会使组织块飘起为宜；( W+ u1 O, d- _' w' {
3、最初的静置放置，这是组织块贴壁的关键，不要总是拿出来看，很影响贴壁的，基本细胞要爬出来也要7天以后了，所以刚培养的几天尽量不要多动培养瓶。
, T1 O2 m! h$ Z) \8 f% y- ~4 {! }4 }" \
哦对了，感觉楼上前辈说的运输可能也有点问题，反正我们都是用培养基运输的，没试过PBS。

chenchunlei

回复 chslyx 的帖子9 y$ ^: O7 H4 c7 i+ i* K

- A% ]) f/ D& }/ q. L; u) k操作是做好在冰上，75%酒精会对细胞有损伤，全程PBS洗即可