求助，原代分离羊膜上皮细胞不贴壁

听不到

回复 fancys1028 的帖子
( Q" D& ?* Z2 u9 x  {- q3 Y
0 ?8 |9 b- N; ^  J那你们消化步骤是如何呢？重复消化吗？我怕我消化时间太长

alicia_86

我们用胶原酶消化的，个人也同意楼上说你培养基的问题。。

听不到

回复 alicia_86 的帖子
, A0 I: w; v1 |9 E, z1 h/ A; W+ b% k- n2 r- z
胶原酶消化下来的不是大部分是间充质吗？培养基应该没什么问题，像EGF，血清这类必需的培养基里都含有了

coffee.cat105

回复 qiaozhong.9876 的帖子( I. e& T" U! |
  c0 D( {. x8 O
请问能不能描述一下您消化的是哪个部分的细胞，我揭了胎儿面那一侧的薄薄的很有韧性的部分消化，从来没有消化下任何一个细胞下来，间充质都没有，一直要消化到靠近绒毛的地方才能有细胞，可是消化下来的还是羊膜上皮吗？  g! p  ]- w% Y" \3 C
还有我的细胞原代长的很好，很快，可是一传代就停止生长，是为什么啊？7 L# R) P  Y, a% A+ |" k4 X. a

qiaozhong.9876

回复 coffee.cat105 的帖子$ E5 X5 \/ g2 r1 i9 Y

% v4 @* A9 A) g3 D# U8 x$ p我选取的是胎盘的胎儿面侧的那层薄羊膜进行消化的，那层细胞我们称之为胎盘亚全能干细胞，不知和你的是不是同一种细胞？我不知道你的那层羊膜状态怎么样，状态好的羊膜可以消化下好多细胞，有时候能达到10的9次方，这主要取决于羊膜的质量，这是我个人的经验，有的羊膜胶质比较多不好处理，还有就是要新鲜的羊膜，不要运输时间太长。关于你细胞传代不长，我觉得原代长的好的，传代也应该没问题，不知道你这种情况只出现一次，还是都是这种情况，如果都是这种情况那就麻烦了。

qiaozhong.9876

回复 coffee.cat105 的帖子, r; h* j& ^, G2 r

3 }9 u# }" P8 r& ^) N% O% Y我是新手，没有权限加你好友

coffee.cat105

回复 qiaozhong.9876 的帖子
3 [" \& r' V+ y
0 P' Z* n6 I; e% d7 [4 u/ N5 W胎儿面是指胎盘拿到以后脐带的那个面的第一层吗？我消化过那一层很薄，上面很多东西，轻轻一消化就会掉下来，但是没有细胞贴壁，是我没消化对吗？( N0 {, |, {1 U: E6 L0 |1 _5 `
我都要消化到靠近绒毛的地方才能有细胞，这一层就紧贴着绒毛，又怕细胞种类不对，特别是它还不能传代。4 ~5 |9 t& @9 a2 X  |
你们一般是消化的胎盘上的羊膜还是胎盘周围的羊膜也可以啊？

coffee.cat105

回复 qiaozhong.9876 的帖子
+ o$ o' r7 r4 s) m5 V- s) Z7 h+ r& c4 z8 T7 y7 B
都是这样的情况啊，是不是细胞不对，您做这个要用胶原铺板不呢？我会先用没有铺的板把间充质先贴掉，在把上清转种到胶原铺的板里，这样做对不对呢？

听不到

回复 qiaozhong.9876 的帖子
' X8 P% l& {# ?+ _$ q# ?$ e2 R* j
我想问问你，你取得的羊膜是一层特别透明的吗？我最后取的是一层很透明的，特别薄的膜，我选了那个进行消化，贴壁了倒是，但是明显不是细胞，不知道是什么，碎碎的，我就怀疑我取得这层是不是不对。我是用载玻片把带血的一面完全给刮掉了，然后剩下一层极薄的近乎透明的膜，特别容易破

听不到

回复 coffee.cat105 的帖子
& B; B( H# T2 U& G' z
/ V" D! B1 e- G$ F  L  X' \6 X要用胶原铺板吗？...我是直接种的，但是不贴壁...