请教有DC-CIK经验的各位大牛~

baby00000003

最近在做DC-CIK方面的准备* \* L1 n' E$ i, ]4 H
想请教一下各位大牛，4 R( O4 J9 T6 A: L4 e
& S. C' d1 r. Q, O2 J* u
DC本身是血液细胞，除去从PBMC分离DC的这一步，为什么从诱导培养到抗原加载再到和CIK混合培养，都是贴壁状态培养呢？
  V4 r9 u+ o, G: y( T/ q( ]$ ?如果用培养袋或者悬浮瓶子是不是可能获得更高的扩增比例、抗原加载效率和更好的CIK诱导成功率呢？

chenzhengliang

DC的前体细胞是单核细胞，PBMC分离铺瓶不到半小时就会贴壁，利用这一性质才得以将其纯化出来，再用GM-CSF和IL-4诱导其向未成熟DC转化，在此过程中会逐渐悬浮起来。

anzhida0823

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8 B0 ]: Q2 G3 i- e  F
$ U; ?2 l7 q# s$ ?5 B0 M! C( RPBMC能够培养增值无异议，DC细胞能增值吗？如果能增值是怎么培养增值的呢？而且培养过程中悬浮起来的细胞是DC么？能继续完成转化么？谢谢指教!

chenzhengliang

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DC是不能增殖的，只会进一步分化。贴壁后，多洗一两遍去掉残留的淋巴细胞，贴壁的细胞为DC前体细胞。9 s5 t* ]) c3 }
加入因子刺激，大部分细胞会转化为DC细胞，少部分则分化为巨噬细胞。DC是悬浮到半贴壁的，吹打即落，而巨噬细胞则贴得很牢。
6 G% g1 M! o0 r; l2 f镜下看，成熟DC周围有很多毛刺状凸起，胞浆丰富，形态为不规则形。

anzhida0823

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9 s  R- l1 u* _5 ~) X
/ m. ^( Y; r7 }* t- o8 c( W9 W! |: D学习了，谢谢！DC培养过程中，用的是DMEM/F12或者1640，除因子外也加血浆，血浆的比例是多少呢？根据经验10%比例添加DC会悬浮起来很多，5%添加的时候就少一些，悬浮起来有可能是血浆的原因么？

baby00000003

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3 s0 s% j. b7 Y" p血浆多少会加速DC前体分化吧，其实FBS什么的都会加速细胞分化，可能的话来无血清培养基最好~

Ivan0108

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现在很多淋巴细胞无血清培养基，细胞培养很好。增殖效率也高，没必要加血浆了

cjsbaicai

就目前的培养技术来说，DC是不能扩增的，也就是说，你分离了多少DC就是多少。我们所采用的抗原负载，只是定向诱导DC呈递特异性抗肿瘤抗原给CIK 细胞

lzlmiranda

游离抗原的负载率太低了，用病毒的话国内很多医院听到这个病毒这两个字管你安不安全全都摇头。

mengnancy

DC培养有条件可以选择无血清培养基，德国的DC细胞培养基，培养的不错。另外细胞因子一定要保证效期，祝你成功。