Feeder free 上培养的人iPS手工分割传代后不贴壁，为什么？

Yorkshining

如题，培养的人iPS，用mTESR1培养，基质胶包被，利用手工分割克隆，加Y27632,48h后观察发现克隆不贴壁，这是为什么啊，求解释...

scottist

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4 k0 g: a' p* S
6 h' P: ~+ P+ w4 D6 R3 M是刚诱导成功的iPS克隆？还是传代的iPS？传代的话用酶消化，加刮刀的方法可以得到大小合适团片（4-20个细胞），如果不经处理，直接分割的话对iPS细胞伤害较大，且得到的克隆团片往往较大，不利于贴壁。

wangxiang

你是不消化直接刮下来么？

Yorkshining

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% p1 W( [6 P# m% x. E# o
) R; d$ d* C- @# s2 f是传代的iPS，为什么刚诱导成功的可以手工传，传代的就不行啊，我诱导的也是在Feeder free体系上做的啊

Yorkshining

回复 wangxiang 的帖子  @8 g1 [! b: u; ^$ v

4 t0 ~6 C2 ^; n) M8 ~9 S对啊，为什么会这样呢？

wangxiang

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: M" f* t( a) d9 w# E5 k: M7 n" c6 D4 T
刚诱导成功挑单克隆用机械传代建系是需要的，之后还是用酶消化传代比较好吧，机械传代对于操作要求比较高，要有规律有方法的刮下来，对细胞损伤比较大，不贴壁可能还是刮的时候操作的问题吧，或是你细胞系本身比较特殊又或是基质胶的问题？导致不贴壁的可能比较多。。。

saifast00

如果刮下来的时候克隆团过大也不利于贴壁，过小会死亡，团块要求很高，如果只是传代的话直接用消化工作液吧，很多公司都有卖商品化的，而且相当便宜

sirius_zou

dispase、胶原酶IV、EDTA传代feeder free体系的ips效果都不错，机械法对细胞损伤大、而且费时费力