请大家来讨论一下四因子诱导小鼠iPS细胞早期靶细胞的形态变化

陈阳阳

错了，6孔板，每孔10万个细胞。一个孔足够了

牙牙丫丫123

建议你使用浓缩后的病毒，这样病毒的滴度高。另外，你包装病毒时候的操作可能直接影响病毒的滴度。我们一般是10cm的皿包装病毒，两次收毒，得到的病毒浓缩，然后取浓缩病毒的1/10用于感染24孔板的1个孔的MEF，MEF汇合度约为30%

ciweiyuan

要先确认感染效率，我的经验是细胞状态和感染效率缺一不可。

宋红卫song

回复 牙牙丫丫123 的帖子/ f. ]2 p" I2 K0 `# ?5 f
; Y% H; M9 p$ Y9 W& _6 w9 V4 {6 i' ^
嗯，非常详细，谢谢！

宋红卫song

回复 牙牙丫丫123 的帖子% k* p$ y# a* S. m  S

2 x. |+ M( Z  Z9 k; x我使用的是病毒浓缩柱浓缩病毒，你们也是这种方法吗？

宋红卫song

回复 陈阳阳 的帖子, S0 T1 P: n6 e. z4 B

3 D3 y2 w+ l$ P. a  X谢谢你！

宋红卫song

回复 ciweiyuan 的帖子% U7 l4 r8 g  \5 F
+ l, J2 k- U) B6 L1 q3 E' ~
很棒的经验，谢谢你！

牙牙丫丫123

回复 宋红卫song 的帖子* M# F. E- [: Q% A- d! O; s+ n
7 a! b1 a0 \3 a% b) q: ]+ N
是的

cicadacjk

GFP感染后4-5d才50%感染效率，这样就不用往下做了* B$ @  q+ f- i* t1 C
7 W: D# f: w& B+ L
逆转录病毒对于小鼠成纤维感染能力极强，一般二次感染后就可以看到100%的细胞都是GFP阳性的。如果达不到这点，一般有几个原因：1.转染太差，GFP转染platE应该达到90%以上，而且要亮；2. MEFs太老，或者没分好，看MEFs的活力，细胞个头要小，培养基清澈，分裂快。  }/ B$ o& \5 Y, E9 o+ N# N; b

- h! W7 y6 Q( j) v另外建议测下支原体，有支原体就扔了重做。

宋红卫song

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% {* ^% u& A" i! }, K谢谢！！