请大家来讨论一下四因子诱导小鼠iPS细胞早期靶细胞的形态变化

陈阳阳

错了，6孔板，每孔10万个细胞。一个孔足够了

牙牙丫丫123

建议你使用浓缩后的病毒，这样病毒的滴度高。另外，你包装病毒时候的操作可能直接影响病毒的滴度。我们一般是10cm的皿包装病毒，两次收毒，得到的病毒浓缩，然后取浓缩病毒的1/10用于感染24孔板的1个孔的MEF，MEF汇合度约为30%

ciweiyuan

要先确认感染效率，我的经验是细胞状态和感染效率缺一不可。

宋红卫song

回复 牙牙丫丫123 的帖子, H: r0 Z" B6 L! x1 U- p6 Z
; `: b7 }! C' q$ _3 u! m
嗯，非常详细，谢谢！

宋红卫song

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* {! J5 \. ^  K; v" e* b; f/ D% H: U: ?
我使用的是病毒浓缩柱浓缩病毒，你们也是这种方法吗？

宋红卫song

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( T# z9 j( ?1 |& S9 M
4 I; M5 |2 Z4 q! W0 [" y谢谢你！

宋红卫song

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) v* u8 g' t  m3 A很棒的经验，谢谢你！

牙牙丫丫123

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. A  Y/ b( @  w  ^& p  y) X. v) `( m" \8 S0 S; w" O
是的

cicadacjk

GFP感染后4-5d才50%感染效率，这样就不用往下做了
# p6 j$ h! u+ X& g! a! [! M
4 B6 N6 w* ~4 z( d" s逆转录病毒对于小鼠成纤维感染能力极强，一般二次感染后就可以看到100%的细胞都是GFP阳性的。如果达不到这点，一般有几个原因：1.转染太差，GFP转染platE应该达到90%以上，而且要亮；2. MEFs太老，或者没分好，看MEFs的活力，细胞个头要小，培养基清澈，分裂快。
  S* T$ S$ n; p/ E7 N: V+ U( V# }0 Z* D: n. ^, F% z* Y, p
另外建议测下支原体，有支原体就扔了重做。

宋红卫song

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5 N- g% A* _) I- _
8 I; g0 L2 y; ~3 X  A, {谢谢！！