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自从实验室引进了OG2转基因鼠之后,小弟从月初到现在最近一直在做iPS诱导。用的Plat-E分别包装pMX-Oct4等四因子,采用脂质体转染法,用6cm皿培养病毒,得到的上清等量感染接种于6cm皿的靶细胞。靶细胞用13.5d的MEF,接种量:1.3X10e5/6cm皿。做pMX-GFP对照,侵染后3-4d有50%以上的细胞带绿光。
$ K1 i3 H/ Z2 j! _- L4 w问题来了,我发现第二次侵染后的4天里,除了细胞的增殖外,几乎没有看到细胞其他的形态变化。手册上说四因子诱导的细胞在病毒感染后形态会出现变化,出现部分集中形态收缩的细胞;至感染后4d会有类似克隆的细胞聚集!!但我诱导了两次都没有观察到这些变化呀!求有相关经验的同行或大神们指点迷津,究竟四因子诱导小鼠iPS细胞早期靶细胞的形态会发生怎样的变化??会有上皮形态的细胞出现吗?我相信这也是诱导重编程过程中的关键阶段,大家来探讨一下吧,帮小弟指点迷津。如果有图的话就更好了!
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补充内容 (2014-12-31 20:35):2 y, K: C$ K+ d7 j: v6 j: q! d
我用6cm皿培养病毒,得到的上清用其一半感染接种于6cm皿的靶细胞(1.3X10e5)。不知病毒量是否太低 |
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