请大家来讨论一下四因子诱导小鼠iPS细胞早期靶细胞的形态变化

宋红卫song

自从实验室引进了OG2转基因鼠之后，小弟从月初到现在最近一直在做iPS诱导。用的Plat-E分别包装pMX-Oct4等四因子，采用脂质体转染法，用6cm皿培养病毒，得到的上清等量感染接种于6cm皿的靶细胞。靶细胞用13.5d的MEF，接种量：1.3X10e5/6cm皿。做pMX-GFP对照，侵染后3-4d有50%以上的细胞带绿光。. q& M  [& t4 }, Z5 M) T
问题来了，我发现第二次侵染后的4天里，除了细胞的增殖外，几乎没有看到细胞其他的形态变化。手册上说四因子诱导的细胞在病毒感染后形态会出现变化，出现部分集中形态收缩的细胞；至感染后4d会有类似克隆的细胞聚集！！但我诱导了两次都没有观察到这些变化呀！求有相关经验的同行或大神们指点迷津，究竟四因子诱导小鼠iPS细胞早期靶细胞的形态会发生怎样的变化？？会有上皮形态的细胞出现吗？我相信这也是诱导重编程过程中的关键阶段，大家来探讨一下吧，帮小弟指点迷津。如果有图的话就更好了！
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$ J! x3 w$ e3 x/ Q9 J" O补充内容 (2014-12-31 20:35):
# Y9 [0 X+ _% {4 g我用6cm皿培养病毒，得到的上清用其一半感染接种于6cm皿的靶细胞（1.3X10e5）。不知病毒量是否太低

宋红卫song

回复 dabai22222 的帖子
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好建议。终于有回复了，谢谢你！

宋红卫song

回复 dabai22222 的帖子# m* C& H: [  `3 U
9 ^; t" h3 s! g
在病毒充足的情况下，感染1-5d（还没铺到饲养层，也不是无饲养层培养），这段时间会有细胞聚集或者类克隆出现吗？

宋红卫song

回复 sylar.wy 的帖子
. h" e6 p) H( Q  p) K1 C9 M4 T  p; ~
嗯，谢谢你的回复

宋红卫song

回复 陈阳阳 的帖子( e+ b7 H) J& N- A( [
/ s: H) |) s7 ], P# j  J
嗯，我用的P1或P2。不知道侵染当天的靶细胞密度多少才合适呢？

宋红卫song

回复 牙牙丫丫123 的帖子$ d! l; g! n1 i2 S

5 w: ]  M1 s5 W; q. L5 x) p嗯，非常详细，谢谢！

宋红卫song

回复 牙牙丫丫123 的帖子- h+ m* F1 q- Y, h0 S) b, r
) m7 d  |( [4 }0 }8 L! D8 d8 E  x
我使用的是病毒浓缩柱浓缩病毒，你们也是这种方法吗？

宋红卫song

回复 陈阳阳 的帖子+ o* w% \% b' R' a
, e" J, c9 W. Q+ Z
谢谢你！

宋红卫song

回复 ciweiyuan 的帖子
) M0 [. Q' x% w0 |
4 {2 R9 u# O# v2 q- A很棒的经验，谢谢你！

宋红卫song

回复 cicadacjk 的帖子: V- u5 X" V, I5 j' S8 Z3 Y) s
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谢谢！！