请大家来讨论一下四因子诱导小鼠iPS细胞早期靶细胞的形态变化

陈阳阳

错了，6孔板，每孔10万个细胞。一个孔足够了

牙牙丫丫123

建议你使用浓缩后的病毒，这样病毒的滴度高。另外，你包装病毒时候的操作可能直接影响病毒的滴度。我们一般是10cm的皿包装病毒，两次收毒，得到的病毒浓缩，然后取浓缩病毒的1/10用于感染24孔板的1个孔的MEF，MEF汇合度约为30%

ciweiyuan

要先确认感染效率，我的经验是细胞状态和感染效率缺一不可。

宋红卫song

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: i+ i3 D" d: r/ W
- x6 Q0 m8 s, l: }% i1 X- |嗯，非常详细，谢谢！

宋红卫song

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$ R- R) ~: a  p1 {
6 H1 F. N( ?/ e8 i" U1 X我使用的是病毒浓缩柱浓缩病毒，你们也是这种方法吗？

宋红卫song

回复 陈阳阳 的帖子$ p) j7 C6 _) c8 e" n

3 a' r4 @+ M/ o$ w' Q5 ?谢谢你！

宋红卫song

回复 ciweiyuan 的帖子4 u1 y& W& c7 a4 g' i" q6 R

1 ~* }2 b0 M+ S# `" i1 w很棒的经验，谢谢你！

牙牙丫丫123

回复 宋红卫song 的帖子% e3 D$ Y, `6 J) T  ?4 |

+ N, }9 x* l* h& y& j是的

cicadacjk

GFP感染后4-5d才50%感染效率，这样就不用往下做了8 N. }& @1 H3 }; j: A' n
5 ]% r9 U8 Y3 m/ m: r2 q0 W6 O
逆转录病毒对于小鼠成纤维感染能力极强，一般二次感染后就可以看到100%的细胞都是GFP阳性的。如果达不到这点，一般有几个原因：1.转染太差，GFP转染platE应该达到90%以上，而且要亮；2. MEFs太老，或者没分好，看MEFs的活力，细胞个头要小，培养基清澈，分裂快。& C: U1 J5 ~- [7 S# Q6 Z
- H0 e1 m* K. B5 l( u: d
另外建议测下支原体，有支原体就扔了重做。

宋红卫song

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谢谢！！