六孔板培养MSC

倒腾细胞

现在用六孔板在养MSC   消化细胞吹打手好累   偷下懒 很多细胞就没吹下来   但是吹太久又怕伤细胞  而且六个孔吹完下来 培养基被氧化 颜色都变了   前辈们有经验传授吗

limeiying

没太看明白，我们正常消化MSC时加0.25%胰酶-0.02%EDTA孵育2min左右，然后拍打板或皿的侧壁，多数细胞就会消化下来，剩下的用移液器吹打就可以了～

倒腾细胞

回复 limeiying 的帖子
* Y- ?8 D4 U: Q2 D, n1 [4 Q
8 f; n* }% A$ k# r2 E7 m# {移液器要吹三十下

wangzhiqi86

回复 倒腾细胞 的帖子
1 M: s" w9 a6 E
7 n/ w; h4 ^3 \' J你的细胞是不是长的太老了？细胞汇合度过高的话，确实很难消化，而且还能看到片状掉下，这是因为MSC胞外基质也会分泌很多I型胶原蛋白。还就是看看你的胰酶确实是有活性的，胰酶用的太久会失活。最后确定在加胰酶之前用PBS已经洗涤过，残留的血清会影响胰酶消化。

倒腾细胞

回复 wangzhiqi86 的帖子9 o# w$ j: G5 Q* a5 p0 X6 M

4 `' Y0 W9 T; S1 c& B$ p/ qP1就会老

wangzhiqi86

回复 倒腾细胞 的帖子/ @: p3 E$ B' q9 z$ y8 U
; Z# C( m3 X* U+ k- d8 Y( e
你的意思就是只能用原代细胞了？那怎么建库。

倒腾细胞

回复 wangzhiqi86 的帖子
* W( D# P- a8 n* A# M( ^8 }) A1 r4 Q7 M. W8 K) J0 u, w' \
是个人问题 没有好的传代用