转贴一个关于肿瘤干细胞CSC表面标记、分离培养等方面的问题

ffps

这几天一直在看CSC的文章，真是云山雾罩啊，请问：
& `1 t4 N# n( T# ?# b1、CSC的表面标记是特异的吗？可以反推吗？例如：研究表明，CD133+是脑CSC的特异标记，那是不是脑肿瘤中所有的CD133+的肿瘤细胞都是CSC？看过一篇关于结肠癌的文献，说262个CD133+的细胞才有一个CSC，是因为CD133不是结肠癌CSC的特异标记？还是不能反推？同理，其他肿瘤中发现的干细胞的标记是不是也不能反推？7 ^; t" N5 n) B) D0 r
2、CSC的分离培养，目前经典的“神经球”法培养脑肿瘤的CSC是不是也可适用于其他实体瘤中CSC的分离培养，用人用过该方法培养其他的实体瘤CSC吗？效果如何？' ]- j& Y6 S5 s; D, j/ u- m! s
3、肿瘤干细胞，祖细胞，边群细胞（SP细胞）之间的关系是怎样的？
2 I" N" K" T4 b  ]7 E4、我现在困惑的是：如果用CD133分选或神经球法分离，得到的阳性细胞是什么？都是我想要的CSC吗？
0 V# ]3 i8 i" U, j5 |! s; X高手们，敬请指点！7 X% Y1 b/ M" A

5 X* ~  x# E' u. l; Z答1：
1 v  j4 P$ a: G7 h
- D$ z6 R3 O0 u6 W- U% c5 C5 Z我也看了篇发在nature 上的有关结肠癌干细胞的文章，文章中所标记的CD133+细胞中肯定是含有结肠癌干细胞，但是不可能全部是，因为肿瘤干细胞的标记物往往不止一个，你比如筛选出乳腺癌干细胞的标记物是CD44+CD24-ESA+，胰腺癌中干细胞的标记物是CD44+CD24+ESA+......而且肿瘤干细胞的数量一般不及肿瘤癌细胞总数的1％，所以在结肠癌中标记出的这群CD133＋细胞的顶多只能称之为colon-cancer-initiating cells。不过这为以后的继续研究提供了很好的目标，即可以找到新的干细胞标记物在这群colon-cancer-initiating cells中进一步分离结肠癌干细胞。
" ]9 F, H6 _* O/ a' O4 H" A$ _# f  f* x* P$ L% i4 G7 `
答2：
" h& K+ d2 t6 R' ~, V( c* O5 [第一个问题，CSC目前未发现特异的标志物（个人认为可能就没有），只有功能学上的鉴定才有说服力（自我更新、多向分化、动物体内成瘤实验），所谓标志物的表达只是鉴定依据之一，不能做为充分条件，甚至必要条件都不是（可能并非所有结肠癌干细胞都表达CD133）。
. X4 B3 w" s! _
9 W* R9 S: F. ?( H; c4 O6 E6 u* a8 G/ R第二个问题，楼主所谓“神经球”法，估计就是采用无血清培养基并添加生长因子（一般是EGF，bFGF）来培养细胞，这种方法最早用于神经干细胞培养，人们也用这种方法培养脑肿瘤干细胞和乳腺癌干细胞。是否所有CSC都能在上述培养基内增殖仍有疑问，因为CSC可能也是一个异质性的群体，不一定都对EGF，bFGF有反应。
9 ]4 t" T* f2 M  q7 ^' L9 S$ u7 \, O) B7 q9 R; R* [5 G
第三个问题，CSC和（肿瘤）前体细胞的关系，如同正常干细胞和正常前体细胞的关系一样。但（肿瘤）前体细胞也可能转变为CSC。所谓SP细胞，是细胞群体内能据染荧光染料的那部分细胞，所占比例极小，所以称为“侧亚群”（side population）细胞。这类细胞能表达ABC转运体蛋白，将有毒物质或染料从细胞内排出。目前知道很多干细胞包括CSC也表达这类蛋白，但不能由此界定CSC，只能说表达ABC转运体蛋白的肿瘤细胞中可能富集有CSC。
! H  p* @, }5 F7 @' r* b5 C0 Q, g6 B6 V+ w. {3 U
最后一个问题，用CD133分选或无血清培养得到的细胞不一定都是CSC，必须进行功能学鉴定。但目前普遍存在这样一个问题：我们鉴定后仍不能确定CSC的比例是多少，只能说CD133阳性细胞的比例如何如何，或者证明我们得到的细胞部分是CSC。至今无法确定CSC的纯度。) @- _/ j: o. z0 L/ B) U
5 V- d. j$ o1 ~& R8 y
以上不成熟的看法请大家批评。
$ ^, i& m5 A4 c; W& h& K2 z% Q0 C5 |4 x3 i1 }' s9 p
答3：
! T$ r& r) s" Z0 t# [& _关于楼主的问题，我也想说说：/ U/ U' z$ m! P* h( q
1、现在关于肿瘤干细胞的研究尚处于初级阶段，除个别组织外，肿瘤干细胞的分离、培养与鉴定仍有很多争议，特异性的表面标记分子仍不明了。故而从现有的研究结果看，CSC只是CD133+的细胞群中的一个子细胞群。% i$ d1 x: m2 J8 g" j  a3 W

: B+ y6 D: {* l* G1 w" l2、肿瘤干细胞，祖细胞，边群细胞（SP细胞）之间的关系，我认为简单的说干细胞很可能是肿瘤干细胞的来源之一，而且是主要来源！而祖细胞是干细胞分化过程中的一个阶段，至于肿瘤干细胞这一分化阶段与祖细胞这一分化阶段是否具有相关性，仍无有力证据说明。# g& `% {+ p) ~; X1 g( \
SP细胞群如楼上战友所言，是根据干细胞的特性，将细胞群中一群能表达ABC转运体蛋白筛选出来，该群细胞只是富含干细胞，又因为肿瘤干细胞在该特性方面与干细胞相似，故而认为该群细胞中含有CSC。但这只是一种可能性而已！
4 l, N4 t( Q7 Y9 Y* u" F( m# K4 o) q% l# P
3、关于你现在的困惑：“如果用CD133分选或神经球法分离，得到的阳性细胞是什么？都是我想要的CSC吗？” 0 Z: h* }  i! f' m1 Z$ r' V% \
我想也是现在大多数研究者的困惑，显然仅仅依靠CD133分选或神经球法分离得到的细胞就说是CSC是缺乏说服力的，个人认为要想证明CSC的存在，体内荷瘤实验是必不可少的，也是最有说服力的。
, q# u& k0 W! X8 ~- @9 v) ?. o0 D. h. a6 z: t
以上愚见，敬请批评。

彩色鹦鹉

非常感谢

hjqincc

正解决了我几个比较疑惑的问题，非常感谢

火云豹

收藏细细品味

大嘴鳄鱼

今天得知论坛前途未卜，赶紧把想要看的几个帖子先粘下来。

火云豹

我的看法是CSC是CD133+群的一部分 反过来 由于肿瘤干细胞分化的不确定性 CD133+群也只是CSC得一个子集 还可能有更多的colon-cancer-initiating cells 或者称为stem-like cell我们目前研究是无限的趋近于干细胞 但还是处于研究类祖细胞的阶段 或者说要反思 每个器官的CSC是否只有一种 比如说我们称之为脑瘤（按部位命名的话）的东西 是因为他发生在脑部 但是它是否来源于同一组织起源 如果是多个胚层来源的 拿它的CSC有可能就不是唯一的 此举例不一定恰当 但表达我的意思

suhsia

好文

suhsia

有意思

mq402716390

dipxoiele

susanliuxue

特异太难找了。