小鼠干细胞培养到第四天，出现死亡，是怎么回事？

wakesman

前三天挺好的，第四天开始出现。
# `# u; l0 @" ]- f刚开始养干细胞，求解答。

cleargreat

小鼠取材，培养液都不说清楚，无法解答。

未来之星

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7 Q+ N; S6 }8 V; J! i
你的问题太笼统了，小鼠的什么干细胞，胚胎干细胞、皮肤干细胞、脂肪间充质干细胞，你得说明白，还有就是你的操作方法也得给说说，再加上你的培养基成分，这样别人才能帮你分析。

wakesman

是小鼠胚胎干细胞，养在3代MEF做的feeder上，用knockout DMEM+FBS5%+Lif+Non-Essential Amino Acids Solution +GlutaMAX+双抗。操作按照gibico的protocol,
5 b$ d4 i3 E% x7 ^) t% b4 [- HFeeder-Dependent Culture and Passaging Mouse Embryonic Stem Cells (mESCs) in KnockOut™ Serum Replacement with Leukemia Inhibitory Factor (LIF)

suning5

多养几次，实验中的各环节都有注意的地方。养个5~6次就好了

Life_Tech

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小鼠的ES不是那么难养的。根据你的描述，有几点我觉得你可以考虑下，1是feeder不能太稀，需要一定密度的feeder直接，跟养人的不一样；2是 Gibco的protocol中建议使用的是15%的血清替代物KSR，没有建议直接用血清养。当然也有客户没有直接参照Gibco的protocol，而是直接使用FBS的，如果使用的是FBS，并不是所有批号的FBS都适合干细胞培养的，可能需要测试批号，还有使用的FBS浓度5%是不是够？因为我们没有官方的使用FBS培养小鼠ES的，我也没法给你建议浓度，如果使用的是FBS建议参考其他文献或者有现成方法的实验室。

Life_Tech

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& x* L! A8 _9 o
, |0 w7 @2 k! X9 a小鼠的ES没有那么容易养死，只是由于增殖特别快，极容易分化，一定要掌握好传代的时间。分化了的细胞你再传代长不动有可能会死。