胎盘间充质分离交流帖

pcljsw2008

我做胎盘做了也有两年了，从脐带到绒毛膜，到羊膜，现在在做基蜕膜，但是感觉取材太难了，底下薄薄一层，后来重新分离了壁蜕膜干细胞，目前除了基蜕膜，其余的都能用酶消法做出来了，大约十毫升组织分离可得到2瓶t75，十天可传代，一比五传，三天到500万一瓶，技术也算比较成熟了，就是遇到了基蜕膜这个大麻烦，不知可有大神做过这个组织提取工作，给我指明个方向，其他的技术也可交流学习

jinhaifeng

结构不是应该：羊膜，平滑绒毛膜，包蜕膜，壁蜕膜的吗？基蜕膜用酶消化法应该也能做出来吧，之前我们连小叶组织也用酶消化法培养出来了
* Z, b* J; {6 d+ Z6 Q+ ?

sjh15123382094

) G( {! u8 a  o; C

8 Q+ D2 `- x! \楼主，我刚开始做胎盘，能不能请教你几个问题：
% A. P0 z. o1 l5 e; p我用的0.1%和0.2%胶原酶Ⅱ30分钟震荡消化，采用300转离心吸取上清的方法，收集间充质干细胞的。但是，细胞收集率怎是偏低，且接种到培养瓶后生长缓慢还死亡较多细胞，几次都失败了。
8 U" h5 y( L0 p1 y# M请问一下，你的酶浓度跟消化时间，还有细胞收集的方法，以及换液的时间跟要注意的问题？可以回答一下吗？ 感谢！
  x1 U- Z% }) X$ L$ M% G7 c5 }我主要做的是羊膜

pcljsw2008

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胶原酶是买的人家的专利，具体含量和种类我不大清楚，我是看消化终点的，羊膜比较稳定，一般有十五毫升的羊膜，剪碎了之后加入胶原酶，37度振荡，待到羊膜碎片变的模糊，有糊状产生时稀释过滤，得到悬液，2000离心，收集沉淀，24h后换液，接三个t75，汇合度在百分之十

pcljsw2008

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平滑绒毛膜你做出来的细胞是啥样子的，我做出来的是弯弯扭扭的，不是梭形的，壁蜕膜做出来细胞偏大，长满t75也就三百万，基蜕膜取材太难了，弄不下来，你是咋取材的

fuyinsheng

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羊膜上有羊膜上皮细胞和羊膜间充质干细胞，这样分离不就把两种细胞混合到一起了吗

pcljsw2008

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+ I3 }% k4 N) x# d: f7 u原代传代时候上皮消化不下来的

fuyinsheng

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那请问原代间充质传代用多大浓度的胰酶消化多久能保证上皮细胞不会被消化下来？