N2B27的标准配方

hujine

文献上说得很简略，找了很久终于找到应其龙原始的配方。引至Embryonic stem cell protocol这本书，希望对大家有帮助。
* q! r: {) ^9 b( l: _$ R9 G$ _1. N2 100X stock solution. For 10 mL, mix 1 mL insulin (2.5 mg/mL final concentration) with 1 mL apo-transferrin (10 mg/mL final concentration), 0.67 mL BSA (5 mg/mL final concentration), 33 μL progesterone (2 μg/mL final concentration), 100 μL putrescine (1.6mg/mL final concentration), 10 μL sodium selenite (3 mM final concentration), and 7.187mL DMEM/F12. Store at 4°C and use within 1 mo." v3 K! o0 ?( K  c$ l8 U' Y3 c8 M0 b
2. DMEM/F12-N2 medium: to 100 mL DMEM/F12, add 1 mL N2 100X stock solution. The final concentration of each component of N2 in the DMEM/F12 medium is 25 mg/mL insulin; 100 mg/mL apo-transferrin; 6 ng/mL progesterone; 16 mg/mL putrescine; 3 nM sodium selenite; 50 mg/mL BSA. Store at 4°C and use within 1 mo.! L$ z4 u% O: |- `
3. Neurolbasal/B27 medium: to 100 mL Neurolbasal medium, add 2 mL B27 and 0.5–1 mL 200 mM L-glutamine. Store at 4°C and use within 1 mo.( M; k; n. _0 D
4. N2B27 medium: mix DMEM/F12-N2 medium with Neurolbasal/B27 medium in the ratio of 1:1. Add β-mercaptoethanol to a final concentration of 0.1 mM from the 0.1 M stock. Store at 4°C and use within 1 mo.

splinkerette

个人尝试过如文章中自配N2（25 mg/mL insulin; 100 mg/mL apo-transferrin; 6 ng/mL progesterone; 16 mg/mL putrescine; 3 nM sodium selenite; 50 mg/mL BSA），但是一方面麻烦，另一方面实际效果做出来反倒还不如invitrogen的N2。。。后来自己比较了下austin smith lab 的N2和invitrogen N2的区别，发现就是insulin 和BSA的量不一样：invitrogen的insulin浓度是5mg/ml, 另外没有加BSA。于是乎就自己再按照比例加了些进去，目前感觉效果还行，不知道养naive ESC的战友们有没有更好的建议

chenkang91

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3 l/ x5 j3 d: _% L
3 B0 L: g7 ~2 c. t7 w; H朋友，你确定这个配方对？ 例如N2 100× 胰岛素是2.5mg/ml，在DMEM/F12-N2中他只加了1ml N2，终浓度却变成25mg/ml？？不应该是又稀释100倍，变为25ug/ml 吗？这太假了。

chenkang91

( |4 `: H# ~/ T# m' G  K

% O, S" f6 T! O0 Y回复 splinkerette 的帖子- A0 q& N8 g8 D& I- O. M3 x

7 m* ?# a' B# H6 p6 Z3 k# E( C; I朋友，你确定这个配方胰岛素终浓度25mg/ml？？不是25ug/ml???

splinkerette

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; Z4 ^9 t* e) J2 @9 S6 d; Q. R9 G' W, O% I5 x/ M: Y" c
感谢提醒，确实应该是ug，我核对了一下，insulin的单位都弄错了，都应该是ug/ml

anning111

当然，成份，含量很重要，但实际上生产工艺更重要，每一种试剂溶解的溶剂都不同，而且加的顺序都是有讲究的，我已开发出这套工艺，生产出来的产品只自已用，不卖出去的。呵呵！

anning111

说明一下，insulin 25ug/ml

splinkerette

回复 anning111 的帖子* J# \. v0 P& d2 Q( ~- T8 o9 `9 e
# a9 ]" d* p6 d$ L$ o* p
不是很能理解培养基需要怎样复杂的工艺。。。溶解的试剂无非就是水或者DMSO或者乙醇。。。全部配成母液再一一加到基础培养基中不就OK了