细胞计数问题

大胖子阿哥

请问间充质干细胞发出去之前，怎么计数，怎么数数和计算的？

大胖子阿哥

http://wenku.baidu.com/link?url=lXf1ZECp7V8PWg-ECoZSyJ8L-YeQIpBd1fLqYDKqNwWpbO3hYRocTxSJTj3zpZljVK3jGAIE1eR4TSdhA7DqfAQLUK86NRn_BYksgprdb1G

wuxiao101325

有条件直接用细胞计数仪，没条件用血球计数板
" @3 R4 u! u" ^, N2 r, S- I5 B附血球计数板使用原理及方法：血球计数板（改良牛鲍计数板）
: e' H6 ~; W3 U/ }, q3 ~: q　　用优质厚玻璃制成。每块计数板由H形凹槽分为2个同样的计数池。计数池两侧各有一支持柱，% h+ f- X8 q/ `$ W! l% h
　　将特制的专用盖玻片覆盖其上，形成高0.10mm的计数池。计数池画有长、宽各3.0mm的方格，分
6 s. T5 b) D7 Z8 k　　为9个大方格，每个大格面积为1.0mm.容积为0.1mm（ul），其中，中央大方格用双线双成25个中# S! _2 W: b6 W* ^7 \
　　方格，位于正中及四角5个中方格是红细胞计数区域，用单线划分为16个小方格。四角的4个大方格, z0 g+ p! W! J8 r9 c3 F+ p
　　是白细胞计数区域，用单线划分为16个中方格。................略（详见血球计数板计数为什么只记活菌数
% F  v9 V/ r4 W1 d% ohttp://wenwen.sogou.com/z/q180912704.htm）

wuxiao101325

我一般用血球计数板计数，细胞计数仪计数要比肉眼多。比如：细胞离心后，用适当体积培养基或PBS重悬后混匀，取出10微升细胞悬液与等体积台盼蓝混匀后加10微升混合液到血球计数板（盖好玻片）的加液槽或玻片边缘（注意：不要有气泡），5或10倍镜下计数四角的四个大方格（每个大方格包含16个小方格），压大方格边缘线的细胞可不计入（也可按照足球比赛的入球规则压线一半及以上的可计入），最后计出的总数除以4（四个大方格）乘以2（台盼蓝稀释倍数）再乘以10000（每个大方格的液体体积）=每毫升所含细胞数，最后再乘以重悬体积，就是你的总细胞数了。

yinfuhua

回复 wuxiao101325 的帖子; v0 t' g9 Q$ g5 u: x+ z

: D% X; ^) l7 ~0 V很详细。

张钰0206

贴壁细胞计数前需消化，如果不需要具体的数目，可以看细胞融合度。

cloudycity

用计数板太麻烦······直接用计数仪······

yuanyecat

可以用计数仪技术，或者你用流式细胞仪，用7-aad和cd271计算精确的间充质干细胞的数目和占总数的百分比。或者用BD的间充质干细胞计数检测试剂盒

龙七

用血细胞计数板：+ s( o3 k& Q2 E2 B) i! x/ I
1、准备1个Ep管，在Ep管中加入20μl 0.4%台盼蓝溶液。0 b5 B4 f( }4 o0 V+ O
2、细胞悬液体积V，充分混匀后，吸取20μ悬液加入到20μl 台盼蓝溶液中，用移液管吹打混匀制成细胞混悬液。
! ?: R7 C  D$ w6 `8 ~) M3、大约3～5min后，取少量细胞和染液的混悬液，在盖玻片的一侧加到计数池内。
+ a4 j. s/ L: E; G9 V4、待细胞沉降后，将计数板置于显微镜上，先用低倍镜观察，再用高倍镜观察死细胞。( |' o& P# K! Q) t, M" `- f" Q: u0 u3 d
5、计数对角线的2个象限细胞总数A。* l+ Z% _: i. Z+ s( ^
6、结果判定：镜下观察，有核死细胞被染成兰色，而有核活细胞拒染，根据下列公式计算：3 N8 C, i; U# L% W# `
细胞总数=A×104×V
2 O, o; `( H& V, A

龙七

如果有条件用Countstar 细胞计数仪，快速准确。