细胞培养常见问题汇总--供胞友们参考

bobo

1.原代细胞与细胞系有什么区别？% S9 v; b# ~4 c
细胞培养物来源于原代外植体或分散的细胞悬液。通常在这样的培养物中细胞增殖形. P" ^; J- W. w2 I4 X3 P" Y
成汇合地单层细胞或密集地细胞悬液。根据传统定义，第一次收获和接种的细胞被称为原代细胞[Freshney, R.I. (1987). Culture of Animal Cells. A Manual of Basic Technique.(New York, Alan R. Liss, Inc.)]. 这类细胞生命周期有限，在有限的生命周期内需掌握好细胞最大的生长空间，以保持细胞群中基因型和表型的一致性。5 A- ~+ f$ J1 J. B0 f" t
细胞系是不断生长，分化的细胞群，因其经过遗传改造，致使其具有无限增长的潜能。' e2 \( ~: ~0 T" L, q8 R
体外生长的细胞系用于医疗或科研。实际上，连续细胞系可以用大量次培养基培养，随着代数的增加细胞的基因型和表型都有可能发生改变。
) Z3 c/ ^% w& P: ?; s- j需要指出的是，在不同的科研小组中这些术语的定义会有所不同。许多研究员不用细' ~4 o/ @/ ^. V2 y
胞系这个词表示细胞群除非细胞经过了遗传改造。
' M$ V2 t  m5 I( k# x2.倍增和代数有什么区别？! X, T7 R; ?  `. U! H
倍增是培养物中细胞总数加倍，通常是指细胞指数或对数生长期。代数是指细胞群从
9 ~1 D- B, _8 X. g0 t6 n培养瓶中移出，传代培养过程的次数，传代培养的目的是使细胞处于低密度以刺激其进一步生长。
3 K! o5 R& V- J: ^3.接收到的冻存细胞该如何处理？
; W2 v8 }. C: U' `  c0 V收到包装箱后，立即将冻存细胞从干冰移入液氮中冻存。此过程尽量快以避免升温。
! o* [# u$ h6 G% C: r% C9 J不要将细胞储存在-80℃，这样会对细胞造成不可挽回的伤害。  ]$ a2 V# q# }5 ]/ j8 m
4.有多少经验才能开始正常人类细胞培养？% Q6 @2 I9 T! c8 ?6 f+ E
推荐有经验者在无菌环境下用层流净化罩工作，如果有经验的话对其它细胞类型也是
/ u+ B- N% n% g, P3 i2 P很有利的。

bobo

5.冻存的细胞该如何开始培养？  |( f% ]+ C0 l; i; y& B
⑴将一管细胞从液氮罐中取出，注意保护手和眼睛。  ?: Y* n" B6 \8 E# T% j! f
⑵用10 秒钟时间将小管的盖子拧松1/4 以去除残留在螺纹处的液氮，然后将盖子盖紧。
& l# x/ f4 B7 w⑶将小管放入37℃水浴中，轻轻握住并旋转，直到管内物体完全融化。
+ g4 b+ {3 N" G; P. q( A⑷将小管立即从水浴中拿出，擦干，转入无菌环境。
7 V: J, z. g/ F) s⑸用70％的酒精冲洗小管，然后擦去多余酒精。
( u+ L! m7 j- h* P+ L⑹打开盖子，注意手指不要碰到里面的螺纹。用1ml 离心管离心内容物。
/ l; b7 i9 H" ^1 j9 R3 C6 F* x⑺平衡管内物，用多聚赖氨酸包被培养瓶(多数细胞用T-75 的培养瓶)。多数细胞类型推& L: v0 J* c! Y' \! c
荐接种密度为每平方厘米5000 细胞。
2 V6 U' C3 Z: m⑻盖好盖子，轻轻摇晃培养瓶以使细胞分布均匀。若需要气体交换可打开盖子。2 Z/ K9 t& }! N$ H) Y$ {
⑼将培养瓶放放培养箱中(37℃,5%CO2,95%空气)
1 R  n) D3 B( v5 [⑽植入培养后第6-16 小时更换一次培养基以去除残留的二甲基亚枫和未贴壁的细胞。  k# u7 h3 [3 y, O
6.当我第一次植入正常人类细胞时需要旋转细胞去除二甲基亚枫吗？
+ m/ l3 I8 S0 n8 o  N% I) F+ i  I/ c第一次植入正常冻存细胞时，我们不推荐旋转去除二甲基亚枫。离心过程比残留二甲, T+ }/ V6 u0 \/ H* G. }1 j
基亚枫对细胞的伤害更大，尤其是不正当的高速旋转。我们的经验是如果二甲基亚枫的浓' A( P2 v5 s9 ?8 M. l% d8 P9 q4 R3 g
度很低，细胞不会受毒害。如果你将1ml 细胞植入已加入15ml 培养基的T-75 培养瓶中，
1 t9 d! m$ G2 Q: \% e0 `" e二甲基亚枫的浓度将小于0.67％，没有发现负面影响。实际上，如果细胞的接种密度为
( v2 N: e- v: Q2 m0 @, l每平方厘米5000-10000，二甲基亚枫的浓度很低。
, E2 R$ C! L, D5 b4 f! G* B& Y7.多久更换一次培养基？% S; ^% A, k( y& x
一般2-3 天更换一次培养基，这取决于细胞生长的速度。许多细胞培养实验室通常在# _! u# T4 W0 K; d: N
周一，周三，周五更换培养基。2 ~$ y& ^$ J8 g: ^6 n2 q* B! |
注意：第一次植入冻存的细胞后，在6-16 小时内更换培养基，以去除残留的二甲基) b) M$ _  |' M3 f, I
亚枫和死亡细胞。
2 w; F0 w- U# a& v9 Q/ C/ c8.我能扩培和再冰冻ScienCell 的正常人类细胞吗？
0 y( K" y. L% b) L% U, I, M7 l这取决于细胞类型。一些细胞类型像神经细胞，神经胶质细胞和一些生长缓慢的上皮# ]: l8 e: U6 e6 F/ @$ S
细胞不推荐扩培和再冰冻。其它的细胞类型像成纤维细胞、星形细胞、肾系膜细胞、星形
' u. q9 e5 P" _7 c# b. r% s胶质细胞等等可以扩培和再冰冻。然而，需要注意的是再冰冻的过程可能导致细胞生长性
8 w8 N8 M/ K$ O) W" F能的改变。
0 g  B2 o0 f/ P2 F: A9.我能长时间冻存 ScienCell 的培养基吗？
- B. X% Q# r; [5 x8 J& U不推荐冻存培养基，冰冻高营养的培养基将导致培养基成分不可逆降解。
3 k$ i% e1 U! t7 w( j- u10.培养瓶中应该加入多少体积的培养基？
- Q5 x% t7 v, ?5 q推荐用量：T-25 培养瓶5ml,T-75 培养瓶15ml,T-150 培养瓶30ml。

wangqs18

谢谢啦，偶是新手，会多多来学习，请多多指教