干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

 

 

搜索
朗日生物

免疫细胞治疗专区

欢迎关注干细胞微信公众号

  
查看: 46989|回复: 14
go

[请教] 培养基污染   [复制链接]

Rank: 1

积分
49 
威望
49  
包包
469  
楼主
发表于 2015-3-8 09:51 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
培养基瓶底有白色颗粒沉淀,取样在显微镜下观察也没找到污染源,微生物细菌之类的 这是什么情况
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 1 + 5 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 1  包包 + 5   查看全部评分

Rank: 2

积分
201 
威望
201  
包包
459  

优秀会员

沙发
发表于 2015-3-8 22:11 |只看该作者
是什么培养基??7 j- U: g- j  }4 }* ~$ E1 I2 O- v
1.如果是加来了国产胎牛血清或是自制的,估计是血清冻融后的析出物。
2 N; U" Z9 D& t2.培养基杂质,过滤一下应该可以用。
# k& Z5 v7 C1 @* U# }7 T, |3.培养基某些成分析出,看能不能摇晃溶解。
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 5 + 15 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 5  包包 + 15   查看全部评分

Rank: 2

积分
150 
威望
150  
包包
431  

优秀会员

藤椅
发表于 2015-3-9 08:30 |只看该作者
你养的是什么细胞?白色颗粒不一定就是细菌,也可能是细胞团
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 2 + 10 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 2  包包 + 10   查看全部评分

Rank: 3Rank: 3

积分
386 
威望
386  
包包
996  

优秀会员 帅哥研究员 金话筒 小小研究员

板凳
发表于 2015-3-9 08:51 |只看该作者
干细胞之家微信公众号
镜下很难观察出污染源的,有条件的做一下细菌和内毒素检测,如果没问题,有可能是培养基内容物析出,过滤一下就可以,不影响使用。
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 3 + 10 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 3  包包 + 10   查看全部评分

Rank: 2

积分
291 
威望
291  
包包
1170  

优秀会员 帅哥研究员 小小研究员 热心会员

报纸
发表于 2015-3-9 09:03 |只看该作者
有白色颗粒沉淀不一定是培养基污染了,我之前用过很多LONZA的培养基,很久以前用的paa的培养基都出现过白色颗粒沉淀,需要进一步鉴定的。本来是4度保存,位置不够所以放入-20度保存,拿出来溶解后就经常看到白色颗粒沉淀。但是,目前没有对细胞培养造成影响。
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 6 + 20 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 6  包包 + 20   查看全部评分

Rank: 2

积分
205 
威望
205  
包包
1368  

优秀会员

地板
发表于 2015-3-9 10:06 |只看该作者
培养基中是否已经加入血清?如果是纯DMEM培养基中有白色沉淀,肯定是有问题。但估计你的培养基是加过血清的,白色沉淀就是血清中蛋白的沉淀析出。不用担心,对于一般实验无影响。
. ~4 c7 ~8 H* `# b8 M3 c/ |9 C
7 N3 `/ y% F9 b2 y+ [- y* ~血清最好在4度过夜融化,室温或者37度融化血清容易造成蛋白质沉淀析出(蛋白需速冻慢融)。。
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 6 + 20 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 6  包包 + 20   查看全部评分

Rank: 2

积分
130 
威望
130  
包包
541  
7
发表于 2015-3-12 09:22 |只看该作者
镜下是比较难看出污染的,可以取2-3ml置于37度摇床培养,观察有无浑浊,或者直接放在培养箱培养进行无菌试验。如果是已经配好的培养基(加入血清和因子)可以先进行吹打,因为一些析出的因子会继续溶解,若是基础培养基就要万分小心了。
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 6 + 20 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 6  包包 + 20   查看全部评分

Rank: 2

积分
73 
威望
73  
包包
344  
8
发表于 2015-3-12 14:03 |只看该作者
取样进行微生物培养即可(将培养基混匀,各取样10ml,分别打入BPA/BPN中,放入微生物培养仪中培养)或者取1ml接种血平皿。单纯的培养基中是不应出现白色颗粒状沉淀的~
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 5 + 15 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 5  包包 + 15   查看全部评分

Rank: 1

积分
威望
6  
包包
154  
9
发表于 2015-3-13 11:17 |只看该作者
如果你加了血清的话,有可能是蛋白析出物,不过不要仅在显微镜下观察,最好是做一下无菌检测、内毒和支原体检测,确保后续实验不受影响1
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 3 + 10 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 3  包包 + 10   查看全部评分

Rank: 1

积分
46 
威望
46  
包包
307  
10
发表于 2015-3-16 11:05 |只看该作者
这种情况我也遇到过,一般都是培养基从-20度拿出来直接室温融化就会这样,有蛋白析出,37度水浴就不会有这种情况,放一段时间这些白色颗粒会减少甚至消失,我是放一段时间直接用,没有影响细胞培养
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 5 + 15 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 5  包包 + 15   查看全部评分

‹ 上一主题|下一主题
你需要登录后才可以回帖 登录 | 注册
验证问答 换一个

Archiver|干细胞之家 ( 吉ICP备2021004615号-3 )

GMT+8, 2025-5-3 22:56

Powered by Discuz! X1.5

© 2001-2010 Comsenz Inc.