|
- 积分
- 0
- 威望
- 0
- 包包
- 9
|
一、诱导方法
( [( u7 h$ b; P1 X1 ]5 d将细胞悬液置于 50 mL聚苯乙烯培养瓶(Nunclon)中培养。完全培养基中加入能诱导MSCs 向软骨细胞转化的诱导因子: (一致统一的诱导物质)
6 E( r# k/ A' N6 k2 u" s H转化生长因子β1 10ng/ml,/ Z1 E% W6 S: I) c' S2 r& [8 v9 |' T+ y) g
（左旋）维生素 C 50 mg/L(也有0.1mmol/L)- `1 A: V; m4 z( }/ v; [6 D
地塞米松 0.1nmol/L （也有10 nmol/L）
& e( H/ E" k! l$ H9 rITS 50mg/ml
w& X8 U0 o9 O; h( d- D% H丙酮酸钠 1mmol/L
, Q' J# N2 p5 b; @亚油酸 5.35ug/mg" k: |5 ^# Y. J3 T# T
牛血清白蛋白 1.25ng/ml。
& Z' J+ M' U- y, b6 p倒置显微镜逐日（1－3 weeks）观察细胞生长情况。细胞长成单层后进行传代。
% o3 o0 s8 h4 g9 X: u- @* ]" z/ r+ {2 `" y! F& }; s5 s5 Z
细胞培养3周。去除培养液,晾干,
/ A- n5 j% j1 K+ D |) g①细胞用通用Ⅱ型胶原检测试剂盒(晶美生物工程有限公司) 免疫组化，按试剂盒说明书操作；
$ E4 P% [1 s# @$ ` G* @②用alcian blue 孵育5 min, 流水冲洗2 min ,
n% N. f( m( b* Q麦氏苏木素复染5 min ,流水冲洗2 min ,晾干，; \2 l- }3 k3 j' Z7 X. v" D
显微镜下观察细胞的蛋白聚糖沉积。
0 j, d* o' C {5 D. F- [0 y* b4 z& p8 N, \
或者用甲苯胺蓝染色，具体我也没做过，查到一篇文章中是这么说的：
& x$ I0 r& }0 L/ _0 \9 WMSC成软骨诱导后的甲苯胺蓝染色检测：: Q0 p" N/ R. H0 W0 U0 L1 _
培养不同时间的MSC培养皿倒掉诱导培养液，
0 P5 B( s- g) W) R+ |$ x5 k$ \10％甲醛固定lh，+ K0 N; Q* j, G4 Y2 P# o5 V, n+ l( C
自来水冲洗15min，
3 w k3 d4 N; u双蒸水冲洗1次，
: p, D L8 G; @1 j! n滴加1％甲苯胺蓝染液于培养皿内，染色3h，
9 I u1 M u" c) K. N0 |& l加人95％乙醇，洗去多余的染液，9 X. v: e& r C, v |
烘干，中性树胶封片。 |
|
发表于 2009-3-24 11:07
发表于 2009-4-9 10:07
