诱导骨髓间充质干细胞成软骨分化

richy

一、诱导方法
+ v! X8 P; W7 B将细胞悬液置于 50 mL聚苯乙烯培养瓶(Nunclon)中培养。完全培养基中加入能诱导MSCs 向软骨细胞转化的诱导因子: (一致统一的诱导物质)0 J1 L  q' Z4 n* w; Q
转化生长因子β1 10ng/ml,
3 C6 M& _/ p5 Z: s: N, n5 U（左旋）维生素 C 50 mg/L(也有0.1mmol/L)
$ i% ?& C7 }' D, C4 u' Z9 s地塞米松 0.1nmol/L （也有10 nmol/L）2 z! d, v. o6 i
ITS 50mg/ml: L6 E3 M$ j) p: \1 Y8 b' O
丙酮酸钠 1mmol/L9 E) Z8 r/ J  O8 w) G5 i  ]4 m$ w% J9 j
亚油酸 5.35ug/mg
5 b# n8 l  |4 t8 {) e# _牛血清白蛋白 1.25ng/ml。
, k& r" @1 \  X# j5 e倒置显微镜逐日（1－3 weeks）观察细胞生长情况。细胞长成单层后进行传代。+ ]) |- K+ h$ j% d
5 w  `) c2 Y8 Q4 D; v# O
细胞培养3周。去除培养液,晾干,
' s4 E  p' S: D①细胞用通用Ⅱ型胶原检测试剂盒(晶美生物工程有限公司) 免疫组化，按试剂盒说明书操作；  `# {( P0 ]: m. t8 e6 Z1 Q$ x' ]
②用alcian blue 孵育5 min, 流水冲洗2 min ,, q; [3 `; {; I; Y% j) `/ f
麦氏苏木素复染5 min ,流水冲洗2 min ,晾干，
6 o% f- @* m; c- j  |" I: g显微镜下观察细胞的蛋白聚糖沉积。6 i8 r6 @2 k5 @3 n/ v$ j( T% C

3 I1 l* y" ~: z  A3 \) o0 m或者用甲苯胺蓝染色，具体我也没做过，查到一篇文章中是这么说的：
: ^8 {6 E" A9 z* B. _MSC成软骨诱导后的甲苯胺蓝染色检测：
: ^  x' Y+ J( W/ H' p7 [培养不同时间的MSC培养皿倒掉诱导培养液，; _; W& M- u% [9 s
10％甲醛固定lh，
8 J2 F! q6 c" L4 E自来水冲洗15min，
2 {$ Z" A7 W# \  x双蒸水冲洗1次，
5 a8 W! A* @( F# J: V/ j滴加1％甲苯胺蓝染液于培养皿内，染色3h，' b$ x" Y( ~& o# ~" s- v: H' ]7 _
加人95％乙醇，洗去多余的染液，
# H2 v9 D5 B( s) H/ ?% X% X: m烘干，中性树胶封片。

april

好！！！！！！！！！！！！！