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xiaoyuのhappy

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楼主

发表于 2015-4-10 10:59 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

请问一下用表达绿色荧光蛋白的病毒感染干细胞后，为什么会有很多细胞表达很弱的点状的荧光？是阳性还是假阳性？

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沙发

发表于 2015-4-19 18:56 |只看该作者

你是在microscope下看到很弱的荧光嗎? 可以讓它們長多一點後去做Flow Cytometry確定一下喔~

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xiaoyuのhappy

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藤椅

发表于 2015-4-22 16:12 |只看该作者

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& N2 \& s) G7 c3 i7 G
在显微镜下看是很多细胞上某些点有荧光，做流式的话阳性和阴性没有明显的分开，荧光由弱到强都有。是不是弱的荧光并不是真的表达了绿色荧光蛋白，而只是黏在细胞膜上？

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chiefcat

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板凳

发表于 2015-4-25 22:53 |只看该作者

本帖最后由 chiefcat 于 2015-4-25 22:54 编辑

"做流式的话阳性和阴性没有明显的分开" 是指沒有看見兩個不同的population嗎? v% V! q$ f8 \' [8 s1 B7 R
例如, 下圖明顯的有兩團cell, 左邊的是GFP-ve, 右邊的是GFP+ve,8 d7 l5 ~+ q/ S$ t" z
你做流式的時候有看到類似的pattern嗎?

還有, 显微镜的laser強度會不會都調得太強? 那些弱荧光都有可能是noise

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