间充质干细胞上清液蛋白含量为什么没有？

happy_noel

有谁做过间充质干细胞上清液的收集？请问是如何进行饥饿培养的？我们是72h后收集上清，做BCA检测，用DF12做标准曲线，结果发现上清液中根本没有蛋白，吸光度是负值。不知道是什么原因？请各位高手帮忙分析。以前用康宁血清还有结果，后来换百灵血清就一直测不到蛋白含量。同样的方法步骤。饥饿培养都是无血清。和之前的血清有关系吗？因为换了血清就没蛋白了？还是饥饿培养时间太长了？

helong

你的对照（DF12）是不是有问题

helong

否则就真的被细胞吸收了？

happy_noel

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9 ^4 r& s) _; g, b8 R. w2 m, k, J( j
- B- z' z) s" F/ N考虑过这个问题，换过DF12，结果还是没有蛋白。

happy_noel

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& C1 u" ~' C3 `  v
/ {+ ?9 F! x, I考虑过这个问题，可是间充质干细胞自己也会分泌蛋白，自己分泌的蛋白不会自己吸收吧？但是为什么吸光值都是负值？

happy_noel

; H& c: w6 P. [
标准品浓度为0,125,250,500,10007 t& M: y0 Y9 w; g1 g( p" x
减去空白值后吸光值都是负值

WeiTing

DF12均值太高了，有物质产生吸收值，可以尝试改用Thermo Scientific™ Pierce™ Coomassie (Bradford) Protein Assay。

happy_noel

回复 WeiTing 的帖子  V' g( ^  @1 y, t0 s! f
$ B2 N. _. L  V. \9 E
无血清DF12一般吸光值是多少？0.9算是高吗？我还做出过1.2的了。

WeiTing

回复 happy_noel 的帖子/ o. w1 `9 U& o5 }5 H1 @! X2 q
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还有一种方法可以尝试，BCA检测中，低浓度的蛋白测定，在说明书中提到使用温度60度、30分钟的反应模式