请教成体MSC如何培养？？

awangling

如题，成体MSC在外周含量极低，大家是如何做到纯化的？？利用MSC标志物流式或磁珠分选？？
6 @5 P) ~) b1 v/ ]看到很多文献讲肌肉干细胞、脂肪干细胞…………方法中与培养一般肌肉和脂肪干细胞一样，没有什么不同。
4 V' i# N8 |1 h! U却写成培养干细胞，请教大家到底是怎么培养外周干细胞的！！！！另外发文章时，审稿人肯定会提这个问题，你是怎么纯化的（虽然你的文章没写过程）？？
) R% W8 Z/ Q( k' ^8 b# z2 f6 w最近我投稿碰到审稿人如此的问题，请教大家有什么好的回答方法么1！！！！！  z; q* H& x3 @% A

luckyliu

培养过程中的选择性培养基
& z0 ?* Q2 c" t0 F1 J$ \培养后的流式检测

awangling

楼上，我也做了这方面的工作2年，光靠这个改善培养条件和选择培养基与血清，
/ l' g+ n6 u6 e- u0 m4 ^" ]可能一小点程度提高干细胞的纯度11
0 u' T5 P- S; \  i7 J但还是不可靠啊！！远远不能称呼其为干细胞的！！. S: O% e- ?$ g4 p& \
自己都会怀疑的！！更说服了不审稿人！！

awangling

回复 luckyliu 的帖子
& C% b( [* f  |. T  r( g9 a' W$ n/ e; O9 T* B1 W' O
请问你就是按常规教材上说的方法和培养基与血清培养的吗？？？？
) }0 A6 ~( ?9 H+ Z3 A8 ^你投稿审稿人提出这样的问题：你就是在培养普通细胞，并非高纯度的干细胞
4 T3 Z" w+ e! X7 M* Q9 y0 K请问您是怎么回答审稿人的？？

sdwzg119

回复 awangling 的帖子: M( I' {* ?- Q+ l
4 P# X3 S. |0 Z: j) Q
MSC有它公认的鉴定标准啊.......................为啥非要专门的纯化过程呢？1 B" o$ ~& ]4 O2 U7 s# L% [3 v/ Q2 j

, R4 V$ E' o! a你就告诉他，MSC的国际标准是XXX；我得到的细胞是XXX不就行了？？？？

awangling

就靠你那个条件培养？？和非干细胞基本接近的培养方法，得到的就是干细胞？？只能说明里面有极少一部分干细胞罢了！
1 b0 |7 u4 r8 V+ Q2 m流式鉴定，可以基本上可以达到SICT对MSC的定义标准，其实里面的干细胞并不多！！！！

yahooyeah

分化实验加表型鉴定能否说明问题？这个貌似是文章中通用的方法。

awangling

回复 yahooyeah 的帖子" X; J( h5 k# m$ v7 o) V
3 m- `6 h0 [% [0 L- g1 i& o# h- X2 p9 k
只要大量细胞中含有干细胞，那怕是10000个细胞中有1个干细胞，1个12孔中有10几个干细胞就可以做可以成骨成脂分化染出色来！！
: h0 V8 `) `- a/ n) ]5 x% u我不是否认细胞中没干细胞，反证法证实存在有干细胞是没有问题的。
8 d! k& E; a) J0 X- }我是讲普通培养的细胞中干细胞含量太低，目前这些什么培养方法，没有看出那个条件培养方法可靠，你不信你把什么肌肉、脂肪、椎间盘甚至软骨原代细胞直接诱导分化2 I: ~& F% T" S5 z& _2 l
也能染出极度少许特异染色来！！& h: D$ H8 S' f; p9 j
现在抛出一个问题，你讲就 那些培养方法培养的是干细胞，里面倒底能有多少个，纯度有多少？ 你讲只含1%干细胞的细胞群是干细胞？？合适么？
6 P1 I) `; g, C( z  ]2 N0 W本人曾做过普通流式分选，稍高点能达到接近15%，可能是特异标志物不是非常特异，称之养的细胞为干细胞都很牵强。何况这个！！

yahooyeah

回复 awangling 的帖子
# ?" s' C8 L6 t5 o1 \* o
5 K: K( h4 C8 p- ]# C+ t目前分离获得的间充质干细胞都认为是异质性的吧，不过可以用有限稀释做单克隆获取更加纯化的MSC。
$ a. }, e! ^( J. l问题的关键还是在于目前对于MSC的定义不是很清晰，缺乏特异性的标记物，这个问题应该是困扰所有干细胞研究的问题吧，基本都只能从侧面来证明所培养细胞是否具有干性，而无法直接说培养的细胞到底有多少是干细胞。

awangling

/ N7 u' K# ^. `# }$ _- D4 H# l! I

2 D5 E, u% v+ j5 Z5 Q( g所以说问题就在这里！！除了骨髓间充质干细胞能获取不错的纯度细胞外！！3 |* j% x0 I9 o% \- W6 M
其它都只是经验化的培养，当在做转化医学或临床干细胞应用时，如何解决这个问题！！
" W+ ^% p4 u# q& f/ e3 x# l所称之的干细胞，其实就没有几个干细胞，和培养同源的普通细胞没有很大区别，
+ L, ]1 v  L& N( x" L4 o或者称为肌肉细胞、脂肪细胞……还更合适些，这就限制了干细胞的后续实验和应用！！
6 l% _8 t. U' R$ d0 o- a这一直是困扰我几年的问题！！！！！郁闷！！！