求教慢病毒感染相关问题

芦苇浅

1. 请问如果我想在同一个细胞中同时感染10种慢病毒，并能稳定表达产生10种外源基因，请问能实现吗？6 p& }! J0 R* k) A2 X0 A1 ]
2. 如果可以的话，我该怎么控制感染是的病毒滴度呢？一直不明白MOI和病毒滴度的关系，希望能够得到解答。2 U/ Q4 M' u6 y  r& g
3.请问如果将lenti-Cas9和多个lenti-sgRNAs共同感染细胞，一个lenti-Cas9能保证细胞内所有的sgRNA（比如10个） 都能被Cas9结合吗？
' ~& f7 K& h% i# j+ `% U谢谢

hyde

1, 理论上可以实现。
% z; _0 r  Y: i6 Z- T; U, l+ k2，MOI 每个细胞对应几个病毒。 7次方的病毒感染5次方细胞，MOI 是10 的话就加入100ul。$ A2 R! o# n* @' l/ s9 p$ t
3，试试就知道了，应该可以的吧。

helong

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$ G2 ]! ~9 V) b( j  C: D& v( A" ?5 C. v' D
前提是：1毫升有7次方的病毒

helong

1稳定表达产生10种外源基因，可能，但概率低，可能6、5、4、3、2、1种机会大一些；
- ?$ X9 S4 M: Z; r3lenti-Cas9和多个lenti-sgRNAs：应该适当考虑两者比例关系

芦苇浅

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$ c5 F, j0 Q% p8 X% B: |# w% t: X
$ \+ o( [  o" ]- N) A7 S1 e; \, _谢谢您的解答，不过YAMANAKA当年用retrovirus共感染24个因子的时候，虽然没证明24个都转染成功了，但至少说明同时感染多个是可以实现的是吧？再就是对于lenti-Cas9和多个lenti-sgRNAs的比例关系，您是否有相关经验呢？

yuanyecat

请问如果我想在同一个细胞中同时感染10种慢病毒，这个理论上可行，但是实际上很麻烦，我以前做三个就很麻烦了，而且得要多少钱啊，你确定你要用十个基因，一个一个验证不行吗？

helong

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/ N" A( T+ L' B: Q1 M/ f3 h
& Y( f8 b8 O( @! W4 ~3 L24个，不是同时，是用来组合的池子

小咪咪

        MOI 是multiplicity of infection的缩写，中文译为感染复数。一般认为MOI是一个比值，没有单位，其实其隐含的单位是pfu number/cell。后来MOI被普遍用于病毒感染细胞的研究中，含义是感染时病毒与细胞数量的比值。6 n5 Z4 F: H+ j/ |3 l8 L" v; m
然而，由于病毒的数量单位有不同的表示方式，从而使MOI产生了不同的含义。- l6 l% Y9 t$ ?) u: ?
       A ,能产生细胞裂解效应的病毒例如腺病毒、单纯疱疹病毒等习惯上仍用pfu表示病毒数量，因此其MOI的含义与传统的概念相同。
. G1 F* o. n: `' y0 c       B ,对于某些病毒如AAV病毒，无法用pfu表示病毒的数量，而是采用TU、IU、病毒颗粒（viral particles, v.p）或基因组数量（vector genome,v.g.）来表示病毒数量。( _9 P/ ?, B+ z+ L
      采用TU或IU，MOI的含义便是TU number/cell 或IU number/cell。% b$ w) [# J. A9 M+ Z! m
      采用v.p.，MOI的含义便是v.p. number/cell 。
8 b4 \' ]4 P! I! L7 K      采用v.g，MOI的含义便是v.g. number/cell。
! G2 U5 L& T! M( w0 k: ^! J/ Z不同的MOI 表示方式分为2种：
5 K, @! B- w* w7 Z0 W, v1） 以活性单位表示病毒数量，如pfu, TU, IU。这时MOI的含义是指平均每个细胞感染病毒的活性单位数。
5 W1 v- S7 e- U% G2） 以病毒颗粒或基因组数表示病毒数量，如v.p. 或v.g. 。这时MOI的含义是指平均每个细胞感染病毒的病毒颗粒或基因组数。
9 p% d- {2 P' J- P, P- }2 j, T: t( s      值得一提的是，上述2种不同的MOI 表示方式在含义和数值上都有所不同。前一种是传统意义上的MOI，后一种MOI表示方式的含义更为简化和直观，也逐步被一些研究者采用。' x7 H4 x" A. Y5 z( x. U
      MOI的测定: 其原理是基于病毒感染细胞是一种随机事件，遵循Poisson分布规律，可计算出感染一定比例的培养细胞所需的感染复数（MOI）。其公式为：P = 1- P(0) ,P(0) = e-m 或m = -InP（0）。其中：P 为被感染细胞的百分率, P(0)为未被感染细胞的百分率
# b# j$ R. j7 w5 _m为MOI值。例如，如果要感染培养皿中99%的培养细胞，则：P(0) = 1% = 0.01; m = -In(0.01)= 4.6 pfu/cell。
$ L  h; D3 [- \7 y6 G/ e$ ?3 b      由此可以看出，由于病毒特性和研究者习惯的不同，MOI的单位由原来约定俗成的pfu number/cell变成多种表示单位。在阅读文献和写作论文时，应注意MOI的具体含义和单位。

芦苇浅

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( i5 G9 a* T9 W; H' Q1 T" Y
; W+ Q/ i' t# p, f为什么会费钱呢，YAMANAKA四因子利用病毒过表达四个因子不很容易实现吗。