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楼主: h951595223
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CIK培养如何快速增殖   [复制链接]

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发表于 2015-6-5 09:34 |只看该作者
1.细胞密度偏低了,可以稍微提高细胞接种密度,我们实验室是按2-3*106 密度接种,你可以试试。
: G3 I* P) C3 Y; l6 x2.可以试着加入5%的自体血清培养,血清需要灭活,灭活方法:将分离的血清放入56℃的水浴锅30min。
; B. Q- k! j6 i( g, B* g3.还有就是换液频率,换液一定要根据细胞生长情况,如果细胞还没有增殖到喝死数量,你就加液,会导致细胞密度过低,生长缓慢。" Y2 b' Y' ?6 }& H" r* {4 x
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发表于 2015-6-8 16:10 |只看该作者
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+ e1 a  H5 @, z- ~% d9 K
. k  ?- i5 i+ j0 o& S我目前也遇到你说的这种问题,能否请教一下怎么改进?

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发表于 2015-6-9 16:18 |只看该作者
回复 h951595223 的帖子' `6 a! H4 a7 N4 ^* v" C2 q

1 p$ V* `/ e+ W" V请教培养CIK时,CD3单抗只加一次还是全程都加?

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发表于 2015-6-10 08:47 |只看该作者
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第二天加点自体血浆。。白介素2的浓度可以再大一点
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发表于 2015-6-10 08:55 |只看该作者
一般来说可以3天补一次液,另外你的接种密度可以调整到2*10^6,适当隔一天补加点白介2效果会好点。
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发表于 2015-6-10 10:04 |只看该作者
我想问一下,我原来的实验室接种密度都是在1*10^7,这个算是正常的吗?细胞复苏的方案是2*10^6.
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发表于 2015-6-10 19:19 |只看该作者
加完因子后,不要急于补液,要根据培养基颜色的改变在补液,如果患者本身白细胞少,培养基还是红色时,你补液反而吧细胞密度变得更低了,更不利于细胞生长,还有不要每天补液,隔天或者隔2天,补液可以3-5倍的补加培养基
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发表于 2015-6-11 08:15 |只看该作者
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) N, P. e1 D) m2 s
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发表于 2015-6-11 10:04 |只看该作者
个人建议:培养周期一般两周左右,期间加入自体灭活血浆,细胞因子还需添加IL-1α,补液是细胞悬液发黄时再补,时间灵活。
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发表于 2015-6-23 11:08 |只看该作者
给患者回输的细胞不主张向研究一样加各种因子对细胞进行刺激。这样的操作先要考虑添液环节:添液一定是在对光看培养液中有大量的颗粒(即,细胞增殖形成细胞球)才能添液。添液时将细胞球轻轻吹散,添液量一般不超过原液的1倍。这样可使细胞在培养液中保持一定的浓度,才能增殖更佳。细胞浓度太低细胞是无法到期增殖到所需数量的。
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