关于胰酶消化的问题

WeiTing

使用胰酶(TrypLE Select)进行消化时，因为这种胰酶的活性高，所以在第二、三次传代时，通常只在37度反应1分钟，细胞即可脱附。想请问"初代"间充质干细胞在分离贴盘后，达到需进行传代时，胰酶消化是否也维持原定反应条件，还是需增加反应时间?
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- s' g- K+ A5 ~- A' N有人认为需增加时间让细胞全部脱附，也有人认为在固定条件下无法脱附的细胞，可能不是间充质干细胞。

呵呵

同样有这个疑问，之前会消化时间长一点

倒腾细胞

镜下观察 细胞缩了之后有时看不到脱落 但是只要轻轻拍动一下 就会立马脱离  个人觉得增加时间让细胞全部脱落可能就消化太过了

丨叶落知秋丨

胰酶对细胞的负面影响很大，消化时间过长对细胞损伤严重。一般在消化的时候，可以在镜下实时观测，看到80%细胞形状逐渐收缩到椭圆形或圆形，轻轻摇晃培养皿，细胞会离壁，说明消化好了。如果细胞几乎都飘起来，那就消化过了。

fengtingyong

个人认为是在加入胰酶后在镜下观察 发现细胞变圆然后轻拍细胞脱落就可以中和消化了

zjhzxp926

这个首先你要看是什么来源的细胞，不同来源不同方法分离的细胞他的纯度不一样，所以里面有些细胞贴壁能力也不一样，导致消化的时间也会有所增加或缩短。还要看你胰酶消化的浓度。不过时间要控制好，胰酶消化时间太长对细胞的伤害是很大的。