SD大鼠BMSC成骨诱导鉴定求助

lgs1

做BMSC成骨诱导已经两个月了，但是每次von kossa染色效果都不太理想，感觉染了以后细胞只是有点黄色，和论坛里面别人贴出来的图片差异很大，所以想请各位战友帮我看看图片中圈起来的部分是不是矿化结节，我的诱导液配方是α-MEM、10%FBS、10^-7M地塞米松、10mM甘油磷酸钠、50μM VC磷酸酯，诱导时间是28d，还有一个现象是成骨过程中会有少部分细胞成脂，就是图片中间那个红色颗粒，我用油红O染了一下，确实是脂滴。出现这种状况的原因是地塞米松的量多了吗？我是不是需要从调整诱导液配方这个方面来考虑？谢谢大家！

wangling0607

从图上看，感觉你的细胞状态不是很好啊，而且28天长成这个样子，我觉得不太好。

夜光猫

有预先用明胶铺板吗？
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lgs1

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9 i3 L( V/ o. c9 }. ], C( \这是我第一次做的结果，当时也觉得细胞状态不太好，开始细胞都是铺满的，挨得很紧，但是两周以后细胞就感觉变瘦了，之间只有细丝连接，请问我应该从哪些方面考虑优化条件呢？谢谢

lgs1

回复 夜光猫 的帖子4 ?& {" r9 E4 V5 f1 \- K. H

9 a8 V3 @4 w+ W# }5 T我用的thermo的24孔板，没有包被，成脂一周之内就可以做完，就是成骨一直做不出来

夜光猫

这几种诱导中，成脂诱导是最容易的哟。我们实验室有人做成骨的时候没有用明胶普板，2w，3w的时候都不大行，建议你铺板

lgs1

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明胶的作用是促增殖、防脱壁吗？我觉得我的细胞贴壁挺紧的，最近做了个von kossa，你能帮我看一下图里面圈出来的是矿化结节吗？谢谢

细胞海洋

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. z) h; W$ G, y# A3 `: ^2 r% y建议你发新帖提问

leaderhou

选取第三代或者第四代的细胞，细胞长到70%-80%就可以加诱导液了，我当时做的茜素红染色，效果不错

lgs1

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能发个von kossa 或者茜素红染色的阳性图片吗，谢谢，我最近重新做了一次，感觉3周后长了一些黑色颗粒一样的东西贴在细胞上，我能肯定不是培养基杂质，因为贴的很紧，而且细胞和颗粒的接触部位有凹陷，我觉得可以说明是长出来的，诱导的好几个孔里面都有，但是对照孔没有，至于是不是矿化结节我不能确定，很多文献上的图都不是很清楚，等我做完了把图传上来。