今天第一次尝试提取脂肪干细胞，貌似不太成功

Cyclone2009

养细胞新手，今天第一次做了大鼠脂肪干细胞的原代培养，有些疑问，求专业人士指教。。
4 S- l' y1 A" m6 c1. 我是取得SD大鼠腹股沟区的脂肪组织，大剪刀剪碎，然后眼科剪剪8分钟，看起来像浆糊样。然后用1型胶原酶，0.1%，量大约为脂肪体积的2倍，37度摇床45-60min消化。消化完成后，加入等体积培养液中和，吹打的时候发现很难吸上来，应该是内容物太粘稠了（用的一次性的塑料10mL 移液管）,是不是说明剪的不够碎，或者胶原酶加少了？另外，想请教下如何判断有没有消化好呀？
# t. H0 V1 `4 B+ ^7 y2.中和后1000rpm 10min。发现最上层是脂肪，离心管底部有灰白色的絮状物。基本没有牢靠固定于底部的沉淀。。这是什么原因呢？还是细胞是在这些絮状物里面？, u  P+ }/ `3 A5 F$ @0 k8 B
3. 然后我重悬了离心管底部的这些东西，100um细胞滤网过滤，1500rpm 5min. 发现离心管底部也只有很少的沉淀，仍然看上去像絮状物。硬着头皮往下做，10ml培养液吹打，接种。。
  v5 q; e( F& {# r7 C4.显微镜下看到不少 大的小的亮点，感觉像脂肪滴。。请问下是不是当天看不到细胞状的东西？那一般几天可以看到细胞贴壁呢？& H' O4 t: F! X$ U1 S3 P  Q1 x
5.上述就是我的基本步骤，是不是有不对的地方呀？特别是第2和3部，希望高手能够指点。。3 q0 f5 W) d. f. w2 T) \& C" a
  I6 I+ }% a! J4 H
小白跪谢！！！

夜光猫

我们还会加0.1%的胰酶，跟胶原酶一起消化。离心的时候用的1500rpm，10min。) n# {8 q4 T* s7 L6 K
我们一般到第二天换液的时候再看贴壁细胞的多少# \; D3 K  o1 V
祝好运

saier.HK

楼上说的加0.1%的胰酶是可以的，这样能够消化的更好；
1 o/ X. b% k) `, r) T1 Q) D你的培养瓶可以用多聚赖氨酸先铺一下，这样细胞容易贴壁；% d6 Q! s, N9 r# c
不用过筛也行，因为有时候那个组织也能够贴壁，细胞能从组织里爬出来，这些细胞也很纯；$ f* A+ R" s6 i: j* H
一般2-3天就能看到细胞贴壁，这时候可以换全液，如果贴壁细胞不太多，可以换半液。祝你好运！

deshenglll

回复 Cyclone2009 的帖子5 \: Y! g4 e5 @

" R1 l/ c) ~7 D/ I$ g8 y6 @可以考虑用培养基配胶原酶。还有就是过滤可以考虑用输血器

suning5

说对了，白色絮状物内有细胞